潮霉素 B具体使用方法及步骤

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1、潮霉素 B 具体使用方法及步骤潮霉素 B( Hygromycin B )是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus ) 代谢产生的一种氨基 糖苷类抗生素，通过干扰 70S 核糖体易位和诱导对 mRNA 模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死 原核(如细菌)、真核(如酵母 菌，真菌)和高等哺乳动物真核细胞。大肠杆菌(Escherichia coli.)来源的潮霉 素抗性基因，编码潮霉素 B 磷酸转移酶，将潮霉素 B 转化成不具有生物活性 的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用 的选择性标记，用来筛选和维 持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真

2、核 细胞。潮霉素 B 用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生 长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000|ig/ml。对于第一次使用 的实验体系建议通过预实验筛选出最小致死浓度。预实验步骤1) 第一天：未转化的细胞按照 50-70%的细胞密度铺在合适的培养板 上，37口，C02孵育过夜；2 )根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。如哺乳动物细胞，可设定 50、100、250、500、750、lOOOpg/ml。根据储存液的浓度100阳卩1对应稀释设定的终浓度；3) 维持 Hygromycin B 浓度，隔天换液，观察。连续约 7 天，选择 能将未转化的细胞完全 杀死的最低 Hygromycin B 浓度，为稳定转染细胞筛选 用的工作浓度。