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1、细胞建议实验三 细胞膜的渗透性实验一、实验原理红细胞放置在几种等渗溶液中，根据红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可进入，有的溶质不能进入，进入红细胞的溶质能提高红细胞的渗透压，使水进入红细胞，引起溶血。由于溶质透入速度不同，溶血时间也不同。二、实验目的了解细胞膜的渗透性及各物质进入细胞的速度。三、 实验用品1、器材：移液器，烧杯，试管，试管架；2、试剂：阿氏液（或3.8%柠檬酸钠溶液），0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化铵，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/L草酸铵，0.12mol/L硫酸钠，0.32mol/L葡萄糖，0.32mol/L乙醇，0.9%生理盐水。3、材料：
2、鸡血。四、实验前准备器材：移液器（1套/组，25套/班），烧杯（1个/班，25个/组），试管（10支/组，250支/班），试管架（1个/组，25个/班）。试剂：阿氏液（5ml/组，125ml/班），0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化铵，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/L草酸铵，0.12mol/L硫酸钠，0.32mol/L葡萄糖，0.32mol/L乙醇，生理盐水（各5ml/组，各125ml/班），鸡血悬液（5ml/组，125ml/班）。备注：阿氏液：葡萄糖2.02g，氯化钠0.42g，柠檬酸钠0.80g，柠檬酸0.055g，蒸馏水加到100ml，灭菌。生理盐水：称取0.9
3、g NaCl加水定容至100ml。0.17mol/L氯化钠：称取0.9928g氯化钠加水定容至100ml； 0.17mol/L氯化铵：称取0.9095g氯化铵加水定容至100ml； 0.17mol/L硝酸钠：称取1.445g硝酸钠加水定容至100ml； 0.12mol/L草酸铵：称取1.488g草酸铵钠加水定容至100ml； 0.12mol/L硫酸钠：称取1.7045g硫酸钠加水定容至100ml； 0.32mol/L葡萄糖：称取5.76g葡萄糖加水定容至100ml； 0.32mol/L乙醇：称取1.474g乙醇加水定容至100ml。 五、实验方法及步骤1、3%鸡血红细胞的制备： 取5ml 3.
4、8%的柠檬酸钠溶液(阿氏液)放在烧杯中，再取一只鸡的鸡血于烧杯中，不断轻轻搅拌防止血凝（注：一只鸡的血大约50mL左右，按10%的用量加入3.8%的柠檬酸钠）。 取上述血液1mL放在1.5ml的离心管中，2000rpm离心5min，用移液器轻轻吸取上清液,弃去；加入1mL生理盐水清洗红细胞，2000rpm离心5min，重复洗23次（注：从离心机内拿出离心管时切勿震荡，不要用倾倒离心管方法倒上清液，以免红细胞流出。清洗红细胞时用移液器缓缓抽打进行悬浮，防止红细胞破裂）。 在小试剂瓶中加入9.7mL生理盐水，用移液器吸取300L血红细胞加入小试剂瓶中，混匀，即是3%的红细胞悬液，贴上标签备用（注：
5、吸取红细胞加入试剂瓶时可吸取生理盐水清洗几次吸头，使得红细胞全部在悬液中）。2、细胞溶血现象观察取试管一支，加入5ml蒸馏水，再加入0.5ml制备好的鸡血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清。红细胞发生破裂，造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。2、 红细胞的渗透性（1）取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠溶液5ml，再加入0.5ml制备的鸡血，轻轻摇动，注意颜色变化。（2）分别在下列几种等渗溶液中进行实验，步骤同（1）：0.17mol/L氯化铵 0.17mol/L硝酸钠 0.12mol/L草酸铵 0.12mol/L硫酸钠 0.32mol/L葡萄糖 0.32mol/L
6、乙醇 六、实验结果与分析等渗溶液中加入血红细胞，在水和乙醇中可以发生瞬间溶血；在铵盐溶液中加入血红细胞放置一段时间可以看到血细胞发生溶血，但是溶血比较缓慢；在钠盐溶液中不发生溶血，放置一段时间后红细胞基本全部沉降到试管底部；在葡萄糖溶液中放置一段时间后发生了少量的溶血，但是大部分的血红细胞未发生溶血沉降到试管底部，如图所示。图1刚加入红细胞震荡后现象（自左往右等渗溶液依次为：乙醇，水，氯化铵，草酸铵，硫酸钠，葡萄糖，氯化钠，硝酸钠）图2 加入红细胞静置一段时间后现象（自左往右等渗溶液依次为：乙醇，水，氯化铵，草酸铵，硫酸钠，葡萄糖，氯化钠，硝酸钠）七、注意事项及改进1、鸡红细胞的稀释要用0.9
7、%生理盐水，加入的生理盐水体积与第一步取的鸡血的体积相等。2、离心机使用时，要将配平后的离心管对称放置在离心机内，禁止未配平就放入离心机和非对称放置离心管。3、从离心机内拿出离心管时切勿震荡，不要倾倒离心管倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时用移液器缓缓抽打，防止红细胞破裂。改进：3%血红细胞悬液浓度较低，加入水溶液中溶血较快看不到明显的溶血过程，建议是否把红细胞悬液浓度加大一点。八、建议课时安排本实验可以跟红细胞凝集反应实验在同一课时一起做九、回答问题1、 溶液的渗透压主要与哪些因素有关?对简单盐溶液如何粗略计算出其渗透压? 答：渗透压与溶液的浓度和温度有关。=icR或=n/VRT，是溶液的
8、渗透压（kpa），i是等渗系数，V是溶液体积（ml3），n是溶剂物质的量，R是摩尔气体常数。通过公式可以计算盐溶液渗透压。2、 红细胞的细胞膜可以选择透过哪些物质？答：细胞膜是脂质双分子层，其上镶嵌有蛋白(包括糖蛋白，载体蛋白等)。活细胞电性还有膜内正外负的特性。首先，分子量小，脂溶性，非极性的分子会随意穿梭细胞膜，如氧气分子，氮气分子，二氧化碳分子，乙醇分子，甘油；其次，像水分子这样很小的不带电的分子也可以从两个脂质分子中间穿过，而带电的分子即使很小也不好过活细胞的膜(死的就和水分子一样好过了)；最后，像葡萄糖，蔗糖，氨基酸这样的大分子是依靠载体蛋白来介导的(这多数要有ATP提供能量的帮助，
9、而活细胞才能提供ATP)，所以在单独的细胞膜，它们几乎不能通过。3、 为什么铵盐的等渗溶液能发生完全溶血而钠盐的不行？答：（待定）4、 物质跨膜（细胞膜）运输有哪些方式？请比较它们的异同点。答：大分子或者颗粒运输方式有胞吞和胞吐；小分子物质和离子运输有三种：自由扩散，协助扩散和主动运输。蛋白质和某些其它的大的物质被质膜吞入并带入细胞内（以脂囊泡形式）。受体介导的胞吞开始是大分子与细胞的质膜上的受体蛋白结合，然后膜凹陷，形成一个含有要输入的大分子的脂囊泡，也称为内吞囊泡，出现在细胞内。出现在胞内的囊泡与胞内体融合，然后再与溶酶体融合，胞吞的物质被降解。胞吐除了转运方向相反外，其过程类似于胞吞。在
10、胞吐中，确定要从细胞分泌出的蛋白质被包裹在囊泡内，然后与质膜融合，最后将囊泡内的包容物释放到细胞外介质中。胞吞胞吐相同点都以形成囊泡形式包住大分子或者颗粒通过细胞膜不同点形成的囊包从细胞外进入细胞内通过形成囊包的方式把细胞分泌物质输送到细胞外自由扩撒协助扩撒主动运输相同点都是小分子物质和离子通过细胞膜不同点不需要载体和能量，物质从高浓度向低浓度运输需要载体，从高浓度向低浓度运输从低浓度向高浓度运输，需要载体和能量5、选择透过性膜与半透膜有何区别？答：半透膜是指一些物质可以透过，另一些物质不能透过的多孔性薄膜。例如：玻璃纸，花生种皮，猪肠衣，鸡卵的卵壳膜，离体的膀胱膜，蚕豆种皮，鱼鳔，青蛙皮，火棉胶等。根据半透膜是否具有生命现象可分为生物膜和非生物膜。选择性透过膜是具有活性的生物膜，它对物质的通过既具有半透膜的物理性质，还具有主动的选择性，如细胞膜。因此，具有选择透过性的膜必然具有半透性，而具有半透性的膜不一定具有选择性透过，活性的生物膜才具有选择透过性。6、 实验中清洗红细胞时为什么要用生理盐水？答：生理盐水与红细胞不发生溶血，而且氯化钠溶液中的氯离子对实验的没有存在大影响。
