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Sp二步法步骤啊，具体如下：一、1烤片，65C, 2小时；二、二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水：二甲苯I 20min -二甲苯II 20 min一无水乙醇I 15min -无水 乙醇 II 15min - 95%乙醇 10min- 80%乙醇 10min- 70% 乙醇 10min - 双蒸水 10min三、阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37C 孵育 10min, PBS 冲洗 3X5min；四、抗原修复：置0.01M枸橼酸缓冲液(PH 6.0)中用煮沸(95C, 1520min),自然冷却20min以上，至室温，PBS冲洗3X5min。五、正常羊血清工作液封闭，37C10 min，倾去勿洗.六、滴加适当比例稀释的一抗4C冰箱孵育过夜或37C孵育23 小时，PBS冲洗3X5min (用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照);七、滴加生物素标记的二抗,37C孵育15min, PBS冲洗3X5min;八、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37 C孵育 15min, PBS 冲洗 3X5min;九、DAB显色：1ml双蒸水先加一滴A,混合均匀，再加B和C， 再次混匀，三夜混合后，室温反应2一10min，显微镜下观察， 有棕黄色沉淀物，即自来水冲洗，终止反应。十、苏木素复染3一5min，盐酸酒精分化1一2s，常规脱水，透明,干燥，封片。
