《softagarassayprotocol软琼脂克隆形成实验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《softagarassayprotocol软琼脂克隆形成实验（1页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1.软琼脂克隆形成实验1）配制1.2%和0.7%的琼脂糖，高压灭菌后置于55C水浴中，使其保持融化状态。2）配含20%FBS、2x抗生素的2xRPMI1640培养基，37C预热。3）灌下层胶：1.2%的琼脂糖胶与2x培养基1:1混合,加入到6孔板中，每孔3ml,室温放置待其凝固。4）等待下层胶凝固过程中消化B16conshRNA与B16Myo7ashRNA稳转细胞,计数，用无血清培养基调整浓度为5X104/ml,每孔用100卩1细胞，设3个平行孔。5）下层胶凝固后灌上层胶：0.7%的琼脂糖胶与2x培养基1:1混合（温度约40C左右），加入100m细胞悬液，即5000个细胞，混匀，加入孔板中，每孔3ml。6）37C5%CO2培养，约2-3周收细胞，0.1%结晶紫染色，计数并比较两组克隆形成情况。
