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1、旋光度法测葡萄糖浓度实验一、实验目的1、了解旋光仪的构造和旋光度的测定原理2、掌握旋光仪的使用方法和比旋光度的计算方法二、预习要求理解定义；了解影响因素；了解测定意义；了解碳水化合物的变旋光 现象；思考本实验中如何保护旋光仪。三、实验原理当一束单一的平面偏振光通过手性物质时，其振动方向会发生改变， 此时光的振动面旋转一定的角度，这种现象称为旋光现象。物质的这种使 偏振光的振动面旋转的性质叫做旋光性，具有旋光性的物质叫做旋光性物 质或旋光物质。许多天然有机物都具有旋光性。由于旋光物质使偏振光振 动面旋转时，可以右旋（顺时针方向，记做“ + ”），也可以左旋（逆时针 方向，记做“一”），所以旋光物
2、质又可分为右旋物质和左旋物质。由单色光源（一般用钠光灯）发出的光，通过起偏棱镜（尼可尔棱镜） 后，转变为平面偏振光（简称偏振光）。当偏振光通过样品管中的旋光性 物质时，振动平面旋转一定角度。调节附有刻度的检偏镜（也是一个尼可 尔棱镜），使偏振光通过，检偏镜所旋转的度数显示在刻度盘上，此即样 品的实测旋光度a。其旋光原理如图10-1所示。图10-1旋光原理旋光度的大小除了取决于被测分子的立体结构外，还受到待测溶液的 浓度、偏振光通过溶液的厚度（即样品管的长度）以及温度、所用光源的 波长、所用溶剂等因素的影响，这些因素在测定结果中都要表示出来。常 用比旋光度来表示物质的旋光性，比旋光度和旋光度的关
3、系如下：纯液体的比旋光度溶液的比旋光度上两式中，表示旋光性物质在温度为tC、光源的波长为入时的比旋 光度；a为旋光仪所测得的旋光度；l为液层厚度（dm）； d为纯液体的 密度；c为溶液的浓度（g/ml ） ；t为测定时的温度（C）；入 为所用光源的波长（nm）。例如25C用波长为589nm的钠灯（D线）作光源测定某样 品的旋光度为右旋38，则比旋光度记作a25D=+38。比旋光度是旋光性物质的物理常数之一。通过测定旋光度，可以鉴定 物质的纯度、测定溶液的浓度、密度和鉴别光学异构体。四、仪器和试剂旋光仪、洗瓶、胶头滴管、滤纸；蒸馏水、5%葡萄糖溶液、未知浓度的葡萄糖溶液五、实验内容1旋光仪的结构
4、旋光度可以由旋光仪来测定。旋光仪有两种：一种是数字自动显示测 定结果的自动旋光仪，另一种是目测刻度而得结果圆盘旋光仪，如图10-2所示。图10-2 WXG-4圆盘旋光仪2旋光度的测定（1）样品溶液的配制准确称取一定量的样品，在50ml的容量瓶中配成溶液。通常可以选用 水、乙醇、氯仿作溶剂。若用纯液体样品直接测试，则测定前只需确定其 相对密度即可。由于葡萄糖溶液具有变旋光现象，所以待测葡萄糖溶液应该提前24小时配好，以消除变旋光现象，否则测定过程中会出现读数不稳定的现象。预热打开旋光仪电源开关，预热510分钟，待完全发出钠黄光后方可观 察使用。（3）调零在测定样品前，必须先用蒸馏水来调节旋光仪的
5、零点。洗净样品管后 装入蒸馏水，使液面略凸出管口。将玻璃盖沿管口边缘轻轻平推盖好，不 要带入气泡，旋紧（随手旋紧不漏水为止，旋得太紧，玻片容易产生应力 而引起视场亮度发生变化，影响测定准确度）上螺丝帽盖。将样品管擦干 后放入旋光仪，合上盖子。开启钠光灯，将刻度盘调在零点左右，会出现 大于或小于零度视场的情况。如图10-3中a和b所示。旋动粗动、微动手 轮，使视场内三部分的亮度一致，即为零点视场，如图 10-3c所示。记下 刻度盘读数，重复调零45次取平均值。若平均值不为零而存在偏差值， 应在测量读数中将其减去或者加上。a.大于或小于零度视场b.零度视场c.小于或大于零度视场图10-3三分视场的
6、不同情况(4) 测定样品的测定和调零方法相同。每次测定之前样品管必须先用蒸馏水清 洗12遍，再用少量待测液润洗23次遍，以免受污物的影响，然后装上 样品进行测定。旋动刻度盘，寻找较暗照度下亮度一致的零度视场。若读 数是正数为右旋；读数是负数为左旋。读数与零点值之差，即为样品在测 定温度时的旋光度。记下测定时样品的温度和样品管长度。测定完后倒出 样品管中溶液，用蒸馏水把管洗净，擦干放好。按以上方法测定5%葡萄糖溶液的旋光度45次，测定值填入下表相应 位置。再测定未知浓度的葡萄糖溶液的旋光度 45次，测定值填入下表相 应位置。(5) 数据记录与处理按表中设计的项目进行相应处理，最终求出未知浓度葡萄
7、糖溶液的浓 度。12345零点值零点平均值5%葡萄糖的旋光度旋光度平均值差值*比旋光度未知浓度葡萄糖的旋光度旋光度平均值差值*葡萄糖溶液浓度*差值=旋光度平均值一零点平均值六、注意事项1. 对观察者来说，偏振光的振动平面若是顺时针旋转，则为右旋(+ ), 这样测得的+a，也可以代表a (nX180)。的所有值。如读数为+ 38， 实际上还可以是218、398、-142等角度。因此，在测定未知物的旋光度时，至少要做一次改变浓度或者液层厚度的测定。如观察值为+ 38, 在稀释五倍后，所得读数为+ 7.6，则此未知物的旋光度 a应该为+ 7.6X5 = +38。2. 仪器应放在空气流通和温度适宜的地
8、方，并不宜低放，以免光学零 部件、偏振片与受潮发霉及性能衰退。3. 试管使用后，应及时用水或蒸馏水冲洗干净，揩干藏好。4. 镜片不能用不洁或硬质布、纸去揩，以免镜片表面产生道子等。5. 仪器不用时，应将仪器放入箱内或用塑料罩罩上，以防灰尘侵入。6. 仪器、钠光灯管、试管等装箱时，应按规定位置放置，以免压碎。7. 不懂装校方法，切勿随便拆动，以免由于不懂校正方法而无法装校 好。七、思考题1.旋光度的测定具有什么实际意义？2浓度为10%的某旋光性物质，用1dm长的样品管测定旋光度，如果 读数为-6，那么如何确定其旋光度是-6还是+354?3. 为什么在样品测定前要检查旋光仪的零点？通常用来做零点检查液 的溶剂应符合哪些条件？4. 使用旋光仪有哪些注意事项？
