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1、甜菜红色素主要成分抗氧化能力甜菜红色素(Betalain)是红甜菜中有色化合物的总称，由红色的甜菜色苷(betacyanines)和黄色的甜菜黄素(betaxanthin)两类化合物组成，甜菜色苷主要成分是甜菜苷(betanin)，占红色素的75-95；其余尚有异甜菜苷、前甜菜红苷、异前甜菜苷以及甜菜红色素的降解产物。甜菜黄素包括甜菜黄素I(vulgaxanthine I)和甜菜黄素II(vulgaxanthine II o甜菜红色素广泛地存在于藜科、觅科、仙人掌科、商陆科等多种植物中，其中藜科最为人们熟悉的是红甜菜；觅科的叶子花属的叶子花、马齿览的花瓣仙人掌科植物中仙人掌果实、火龙果果皮和果
2、肉。商陆科的商陆浆果，鸡冠花等等也均含有丰富的甜菜红色。国内外现均已将其作为天然色素加以度为30 cI=，时间为20 min。纤维素酶水解枣纤维的最佳条件为：酶浓度01xl0 gg，温度为4O，时间为20min。利用盐酸、氢氧化钠、纤维素酶等3种方法在最佳水解条件下水解枣纤维，所得总糖量和果糖量没有显著性差异。因此，在生产中，可以根据实际情况和需要，选择适当的方法对枣纤维进行水解。开发利用，此外又发现其具有抗氧化和清除自由基的生理功能。但其主要的抗氧化部分是什么还未见报道采用不同抗氧化体系对这两类化合物的抗氧化活性进行评价，来探究甜菜红色素的主要抗氧化部分。1 材料和仪器11 材料和试剂甜菜红
3、色素购于无锡天彩生物制品；ABTS【2,2一azin0_bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfpnicacid)(Sigma)；Trolox(6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid)(Sigma)；DPPH(1，1-Diphenyl-2-picrylhydra-zy1)(Sigma)；TPTZ (Tripyridyl-triazine)(Sigma)；Sephdex LH一20(Sigma)；过硫酸钾：天津市赢达稀贵化学试剂厂：其他所用试剂除特殊标明外，均为分析纯三蒸水配置试剂。12 仪器高效液相色
4、谱(1abAlliance SerieslII)：天津兰博实验仪器设备；Kromasil(C18 5 250x46 mm)：天津兰博实验仪器设备：Muhiskan MK3酶标仪：美国Thermo公司；真空冷冻干燥机(LGJ05)：北京四环科学仪器厂；SK一1快速混匀器：江苏省荣华仪器制造；平底96孔微量滴定板。2 方法21 甜菜红色素中甜菜色苷和甜菜黄素的分离采用Sephadex LH一20分离甜菜红色素主要部分，用pH=56的乙酸洗脱同，收集红色部分和黄色部分，备用。22 HPLC分析色素红色部分和黄色部分阎用高效液相0abAlliance SeriesIII)配合二极管阵列紫外一可见光检测
5、器(model 525)定甜菜色苷和甜菜黄素。将上述冷冻干燥样品溶解过022 m滤膜后进样，进样量为20 ，所用色谱柱为Kromasil C，8 51xL(250x46mmidj。设定柱温为室温，流动相A甲醇，流动相B2乙酸，设等度洗脱(A：B=20：80)，流速05 mUmin，样品洗脱时间30 min，每次进样结束后用100甲醇冲洗色谱柱10 min并平衡后再进样。红色部分的检测波长为538 nm，黄色部分的检测波长为478 nm。23 ABTS自由基清除试验测定抗氧化能力】取过硫酸钾溶液(140 mmolL)88 IxL与ABTS溶液5 mL(7 mmolL)混合避光反应16 h。然后用
6、乙醇稀释ABTS溶液至吸光度为07-+0002。取200 txL ABTS溶液与100ILL样品于96孔板中反应10min在734nm下测吸光度。以溶于乙醇的Trolox溶液为标样，以清除率与Trolox浓度作标准曲线。样品抗氧化能力用TEAC(tr0l0xequivaIentantioxidantcapacity)表看，空白为乙醇。24 FRAP试验测定抗氧化能力FRAP试剂：03 molL醋酸缓冲液(pH36)：10 mmolLTPTZ(于40mmoL盐酸)：20mmoL三氯化铁=10：1：1。200ILFRAP试剂与100 L样品于37反应10 min后在593 nm下测吸光度。以溶于乙
7、醇的Trolox溶液为标样作标准曲线。样品抗氧化能力用TEACtroloxequivalentantioxidantcapacit表示，空白为乙醇o25 DPPH自由基清除试验测定抗氧化能力 51用乙醇配制200 IxmolLDPPH溶液，试验按表1分组，加人96孔微量滴定板的每孔中。26 数据处理计算Torlox标准溶液的自由基清除率，以自由基清除率为纵坐标，Trolox浓度为横坐标做出标准工作曲线。通过计算得到的样品液的清除率，在标准曲线上找出相应的Trolox浓度，可将样品换算成相应的Trolox当量。3 结果与讨论31 甜菜红色素中甜菜色苷和甜菜黄素的分离效果利用Sephadex LH
8、一20对甜菜红色素进行分离，结果显示，用pH=56的乙酸洗脱可以将红色素和黄色素分成明显的两个大的区带，分别收集洗脱液得到色素的两大部分一红色部分和黄色部分。采用HPLC法对通过Sephadex LH一20分离得到的红色部分和黄色部分进行组成成分分析比较，结果见图1一图3。从图1可以看出，分离得到的红色部分在538 nm条件下显示的红色素峰与未经分离的甜菜红色素在538 nm条件下显示的4个主要红色组分中两种含量较高的主要成分一致(见图2)，说明分离得到的红色部分。包含了红色素中的两种主要组分：从图3可以看出，分离得到的黄色部分在478 am条件下仅在15 rain附近出现一个黄色素主峰，为主
9、要的黄色组分；进一步说明两类色素得到了有效的分离。32 甜菜红色素各部分抗氧化能力321 甜菜红色素各部分对ABTS自由基的清除能力ABTS经氧化后生成相对稳定的蓝绿AR-I1s冰溶性自由基。水溶性抗氧化剂与ABTS 自由基发生反应后使其溶液褪色褪色越明显表明该物质的抗氧化能力越强，与含Trolox的对照标准体系比较，换算出被测物质总的抗氧化能力(见表2)。由表2可以看出，甜菜红色素与Vc差异显著(P005)，说明红色部分与甜菜红色素抗氧化能力接近：黄色部分与甜菜红色素差异显著(P005)，说明黄色部分的抗氧化能力不及甜菜红色素。由图4中Ic卯值也可以看出上述趋势。322 甜菜红色素各部分对D
10、PPH自由基的清除能力甜菜红色素各部分对DPPH自由基的清除能力，试验结果见图5和图6。DPPH自由基已被广泛用于测定植物提取物的抗氧化活性领域。在有机溶剂中，DPPH是一种稳定的自由基，呈紫红色，515 nm处有强吸收。当溶液中存在抗氧化剂时，抗氧化剂能够给DPPH自由基提供氢原子和电子使其发生褪色。吸光值变小，其颜色变得越浅表明抗氧化剂的抗氧化能力越强。因此，通过测定样品对DPPH自由基的清除能力可以反映其抗氧化活性的强弱。样品对DPPH自由基的清除能力一般以Ic卯值表示，IC卯值越小表明样品的抗氧化能力越强。由图5和图6可以看出，Vc的抗氧化能力明显强于甜菜红色素各部分。红色部分与甜菜红
11、色素能力相当，黄色部分抗氧化能力很弱。由图6的Ic值也可以看出上述趋势。32_3 FRAP法测定甜菜红色素的抗氧化能力FRAP原理为Fe 三吡啶三丫嗪(Tripyridyl-triazine。TPTZ)可被样品中还原物质还原为二价铁形式，呈现出蓝色并于593 B1TI处具有最大光吸收，根据吸光度大小计算样品抗氧化活性的强弱。试验结果见表3和图7。由表3可以看出。甜菜红色素与Vc差异显著(P005)，说明红色部分与甜菜红色素抗氧化能力接近；黄色部分与甜菜红色素差异显著(P005)，说明黄色部分的抗氧化能力不及甜菜红色素。由图7中Ic值也可以看出上述趋势。4 讨论从以上结果可以看出。未经分离的甜菜
12、红色素抗氧化能力相对较强，可能由于其中还含有一些非色素抗氧化成分。而虽然分离得到的红色部分的抗氧化能力略低于甜菜红色素，但可以说明甜菜红色素中的主要抗氧化色素成分是红色部分，黄色部分也有一定的抗氧化能力，这与EscribanoJ3】报道一致。推测红色部分为甜菜色苷，黄色部分为甜菜黄素，具体成分还有待于进一步的研究。参考文献：1】Dieter Straek，Tham es，Vuget，Willibald Sohliaman，Recent advancesin betalain researchJPhytaehemistry，2 003(62)：247-2692】王璋译食品化学M】北京：中国轻工业出版社，1991：472473
