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1、综合实训一 L-胱氨基酸的制备考核试题答案1.胱氨酸的物化性质是什么，通常提取胱氨酸选用什么原料?胱氨酸呈六角形片状白色洁净或洁净粉末，无味，微溶于水，不溶于乙醇及其他有机溶剂，易溶于稀酸和碱液中。在热碱液中易分解。胱氨酸的等电点（pI）为4.6，熔点为260261。胱氨酸存在于人发、猪毛、羊毛、马茂、羽毛及动物角等的蛋白质中，其中人发含量最高，达17.6%。2.提取胱氨酸时应注意什么条件变化？要注意温度和pH的变化。水解升温到100开始记温，每隔0.5h记温一次，在11.5h内升温至110左右（即罐温）。用硫酸调节pH值时，应用酸度计边测边调。保证其准确性。3.胱氨酸制备的原理？胱氨酸是氨基
2、酸中最难溶于水的一种，因此可利用这种特性，通过酸水解，从废杂猪毛、人发、鸡毛、羊毛等角蛋白中，分离提取胱氨酸。4如何判断水解终点？水解终点的判定，加入10%氢氧化钠溶液2mL，在滴加硫酸铜溶液几滴，摇匀后，如仍有明显的天蓝色表明水解完全。综合实训二：树脂柱纯化法制备谷光甘肽考核试题答案1. 绘制出GSH标准曲线能否快速确定滴定值的大小？如何绘制出GSH标准曲线?取5 mL待测样品，置于250 mL锥形瓶内，加入5 mL 2偏磷酸溶液，1 mL 5碘化钾溶液和2滴淀粉指示剂，用0.001 molL的碘酸钾溶液滴定至溶液由无色变为蓝色止。2.提取时为何加热后又要速冷？防止还原性谷胱甘肽在高温下被氧
3、化。3.树脂柱的装柱操作要点？将市售732阳离子交换树脂磨碎，筛选出6080目。物理方法处理后，先以4倍树脂体积的2molL盐酸搅拌浸泡2h，反复用水洗至近中性后，再用4倍体积的2molL氢氧化钠溶液搅拌浸泡2h，反复用水洗至近中性后，再用4倍树脂体积的2molL盐酸搅拌浸泡2h，最后水洗至中性。按要求装柱后用1 molL硫酸平衡备用。4.怎样收集洗脱液中目的组分？抽提液上732阳离子交换树脂柱，流速6 mLmin，然后用1 molL硫酸洗脱，洗脱流速2 mLmin,25 min左右开始收集5mL流出液,进行快速含量测定,当流出液滴定值超过0.2 mLmL时，开始收集，滴定值低于0.2 mLm
4、L时停止洗脱。综合实训三：锌盐沉析法提取胰岛素考核试题答案1.为何在胰岛素的制备中溶液的pH值不能超过8.0因为胰岛素在弱酸性水溶液或混悬在中性缓冲液中较为稳定；pH值超过8.0会造成胰岛素的不稳定。2.碱化过滤时为何加硅藻土？碱化过滤时为何加硅藻土的目的是，利用硅藻土吸附物质的能力，使硅藻土做为惰性助滤剂辅助快速过滤。3在胰岛素制备过程中，为何选择氯化锌为沉析剂？根据胰岛素易与锌离子结合的性质，用氯化锌作沉析剂，可使胰岛素直接从初步除去碱性和酸性杂蛋白的提取液中沉淀析出。4胰岛素具有哪些性质？其等电点为5.305.35，在pH4.56.5范围内几乎不溶于水，易溶于稀酸或稀碱溶液；在80以下乙
5、醇或丙酮中溶解；在90以上乙醇或80以上丙酮中难溶；在乙醚中不溶；在弱酸性水溶液或混悬在中性缓冲液中较为稳定。胰岛素具有蛋白质的各种特殊反应。综合实训四：DNA制备考核试题答案1.为什么所用离心管等器皿必须灭菌？蔗糖密度梯度在离心中起什么作用？因为细菌中的杂DNA会产生干扰。蔗糖密度梯度可以使DNA停留在与之密度相同的层次里，同时还起到稳定DNA使之聚集的目的。2什么是密度梯度离心？在较大的离心力作用下，不同的DNA 由于其大小、形状和密度不同，而悬浮在不同密度的位置上，从而达到分离。3如何除去鸡肝中杂蛋白？组织液中加入2倍量5的十二烷基磺酸钠，用45乙醇作溶剂，搅拌2030min,在0，25
6、00r/min离心，收集上清液并加入等体积的冷95乙醇，离心即可得到纤维状DNA， 4十二烷基磺酸钠有什么作用？十二烷基磺酸钠是一种变性剂，可以使杂蛋白变性产生沉淀而除去。综合实训五：菠萝蛋白酶的制备考核试题答案1. 如何测得实验所得物的酶活性？精密量取供试品溶液1.0ml，置具塞试管（15mm130mm）中，于370.5水浴预热5分钟，精密加入370.5预热的底物溶液（取硅胶干燥器中干燥至恒重的酪蛋白0.6g，精密称定，置烧杯中，加0.05mol/L磷酸氢二钠溶液80ml，65水浴溶解，放冷，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至7.0，转移到100ml量瓶中，加水至刻度，临用现配）5.0ml，
7、立即振摇，置370.5水浴中准确反应10分钟后，加三氯醋酸溶液（取三氯醋酸1.8g，无水醋酸钠2.99g，冰醋酸液1.9ml，加水使溶解并稀释至100ml）5.0ml，振摇，于370.5水浴中准确放置40分钟，滤过，取续滤液，在2小时内，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录IV A）测定，以水为空白，在275nm的波长处测定吸收度为A，再精密量取供试品溶液1.0ml，加三氯醋酸5.0ml，振摇，精密加入底物溶液5.0ml，同法操作，测定吸收度为A0。另取酪氨酸对照品溶液，以水为空白，在275nm处测定吸收度为AS。按下式计算式中 n供试品的稀释倍数；W供试品的取样量，g；WS对照品溶液每
8、1ml中含酪氨酸的量，mg。在上述条件下，每分钟水解酪蛋白生成与1mg酪氨酸相当的菠萝蛋白酶量，为1活力单位。2菠萝蛋白酶具有哪些性质？成品为浅黄色、无定形粉末，稍溶于水，不溶于乙醇、丙酮、氯仿、乙醚，最适pH值为7，微有异臭；其酶活力能被半胱氨酸激活，而受重金属抑制。3菠萝蛋白酶提取过程中，乙二胺四乙酸有哪些作用？乙二胺四乙酸根是一种螯合物，可有效地螯合原料中重金属离子，以避免其与酶结合而使酶失去活性4菠萝蛋白酶提取过程中，抗坏血酸有哪些作用？抗坏血酸则具有还原性质，分子上的活泼羟基氢可使酶活性中心保持还原状态，从而有效地保护酶活性综合实训六：卵磷脂的制备及鉴定考核试题答案1怎样提高卵磷脂得
9、率。无机盐和卵磷脂可生成络合物沉淀，因此可利用金属盐沉淀剂将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质，这样可大大提高卵磷脂纯度。2根据紫外吸收光谱分析所制备的卵磷脂的纯度。将一定量卵磷脂样品溶于无水乙醇，配成0.1乙醇溶液，用紫外分光光度计扫描其在90-400nm的吸收光谱，可测得卵磷脂的紫外最大吸收峰。卵磷脂紫外最大吸收峰在215nm波长。如果有偏移或者有其他吸收峰存在证明有杂质。3蛋黄中制备卵磷脂时，选用氯化锌有什么样作用？氯化锌是一种金属盐沉淀剂，可以将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质。4蛋黄中制备卵磷脂时，选用丙酮有什
10、么样作用？利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质和胆固醇分离开来。综合实训七：银耳多糖制备及鉴定和含量测定考核试题答案1加入复合酶制剂有何作用？酶制剂的主要作用是酶解细胞壁和细胞膜，使银耳多糖能够释放出来。2CTAB络合法与乙醇沉析法分离银耳多糖有何异同？都是形成多糖的沉淀，乙醇沉析法主要是利用多糖在有机溶剂中溶解度小而沉淀析出。CTAB络合法主要是通过络合反应形成难溶于水的络合物进而沉淀析出。3为何在制备全流程中应时刻注意温度不能超过80？温度过高，会造成多糖的分解。4总糖含量测定原理？蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。反应式：
