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1、第三节基本原理FA、Lamber_Eeei定律二、吸光系数和吸收光谱三、偏离Beer定律的因素四、透光率的测量误差LambebBeer定律：吸收光谱法基本定律描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系Zzz诙疋厂定律：A oc /葭设一東平行单色弟通过一个吸弟物体x=o入射光强为/0 透过光强为I 物体截面为s 厚度为I 吸光质点数为n图H-3光通过截面积S厢隨I的吸光介质续前取物体中一极薄层设入射光强为Ix薄层的吸光质点数为dn不让光子通过的面积为dS = kdn 光子通过薄层被吸收的几率 空二gS S透过薄层减弱的光强为di kdn!叽 _ y k dS*_77 = hh Ix
2、7 sVn由和ze評.C= Lamber - Beer律表达式 - lg = E C II0透光率T = 吸光度A = lgT = ECl或卩= 10 =10曲0E：吸光系数1. Lamber-Beer定律的适用条件（前提）入射光为单色光溶液是稀溶液2. 该定律适用于固体、液体和气体样品3. 在同一波长下，各组分吸光度具有加和性/应用：多组分测定人总=A6/ + Ac + 二、吸光系数和吸收光谱1. 吸光系数的物理意义：单位浓度、单位厚度的吸光度C4讨论：1）E=f （组分性质，温度，溶剂，X） 当组分性质、温度和溶剂一定，E=f （X）2）不同物质在同一波长下E可能不同（选择性吸收： 同一物
3、质在不同波长下E定不同3）Ef,物质对光吸收能力f,定量测定灵敏度f-定性、定量依据2. 吸光系数两种表示法：1）摩尔吸光系数E:在一定九下，C=lmol/L, L=lcni时的吸光度2）百分含量吸光系数/比吸光系数：在一定九下，C=lg/100ml, L二lcm时的吸光度3）两者关系M8 =103. 吸收光谱（吸收曲线）:几A最大吸收X最小吸收I特征值f定性依据 肩峰囂端吸收续前、4.吸光度测量的条件选择：Anax分Anax测定灵敏度咼1）测量波长的选择：；左右o较小的AA4 E = - T须在兄噺下测定 C I2）吸光度读数范围的选择：选A二0.20.73）参比溶液（空白溶液）的选择：空白
4、溶液o配制样品的溶剂3参比池 光学性质和厚度相同 样品池空白溶液+参比池 调光路参=0, 7 = 100%样 品溶液+样品池 4样/注：釆用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射和 界面反射等因素对透光率的干扰三、備离2定律的因素吸光度(人)与浓度(C)关系曲线mJ依擔艇餅定肄A身C美系应为经过原点的直线偏Beer定律的主要因素表现为以下两个方面(-)光学因素(二)化学因素（一）光学因素1.非单色光的影响：丁 Beer定律应用的重要前提入射光为单色光照射物质的光经单色器务芜盾 并非真正单色光其波长宽度由入射狭缝的宽度和棱钱或光栅的分辦率决定为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度
5、这就使分离出来的光具一定的谱带宽度测定波长的选择续前续前设入射光由波长为人和的光组成入射光光强分别为/（）1和/2 对应的透过光光强分别为人和厶1 +7 I 10一QC + I 10E2C4 又T = 仃十上2_ 01丄U十02丄U01 +02 01 +/201 + 02=10曲./oi+/21OD 3讨论：入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状E严E2A二EQI成线性关系&工&=人与C不成线性关系，偏离定律|（E2 - E） T= A与C偏离线性关系越严重结论：选择较纯单色光（入，单色性）.选入max作为测定波长（，St且成线性）续前2. 杂散光的影响:杂散光是指从单色器分出的光不在
6、入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值3. 反射光和散色光的影响：反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光 直接对T产生影响散射和反射使TJ, A$,吸收光谱变形注：一般可用空白对比校正消除4. 非平行光的影响：A使光程f, Af,吸收光谱变形)化学因素Beer定律适用的另一个前提：晞溶被浓度过高会使C与A关系偏离定律340380420460久（nm）水禧液中Cr (VI)两种离子的吸收曲线、透光率的测量误差ATA二-览 T = EC.GC =右浓度的相对谋差iTlgrAC 0.434ATC T-lgT影响测定结果的
7、相对误差两个因素:T和AT AT影响因素：仪器噪音1）暗噪音2）讯号噪音续前暗噪音（一）与讯号噪音（）的谋羞曲线1）暗噪音一与检测器和放大电路不确切性有关与光讯号无关d z 0.434AT、0.434AT(0.434 +lgT)门()=()dT TlgT(T-lgT)2*= lg T = -0.434 , T = 36.80%o对应最小的测量误差3.6A大多数分光光度计的W = 0.2%1%今假设AT = 0.5%适宜测量范围T %2% n测定结果相对误差较小A : 0.2 0.72）讯号噪音一W光讯号有关暗噪音（一）与讯号噪音（）的谋差曲线表明测量误差较小的范一直可延至较高吸光度区,对测定有
8、利1.光源：J磚灯或卤磚灯可见光源3501000nm 1氢灯或宛灯紫外光源200360nm2.单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件r棱镜一对不同波长的光折射率不同 色散元件J分出光波长不等距I光栅一衍射和干涉分出光波长等距混合光单色光山单色器光路示意图（心右）3.4.吸收池：玻璃一能吸收UV光，仅适用于可见光区石英一不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）检狈9器：将光信号转变为电信号的装置厂光电池光电管光电倍增管记录装置：讯号处理和显示系统二极管阵列检测器特点：使囲时来t移动课差对光源要求髙比色池酉已对类型，1.单光束分光光度计:图11-10单光束分光光度计光路示意图1.澡餡灯2.笊灯3凹面镜4.入射狭缝5.平面镜6、8.准直镜7.光栅9.出射狭缝10.调制器11.聚光镜12.滤色片13.样品室14.比电倍塢管双光束分光光度计:图1111双光束分光光度if光路示直图L鸭灯2.笊灯3.凹面镜4.处色片5.入射狭缝6、1()、20. TlftfW7、9.准贏镜 & 光棚11.岀射狭漲 12、13. 14. 18、19.凹面置15、21.重面憧16.參比池17.徉品池 22.比电/特点：不用拉动吸敕池可以减小移动课羞对光源要求不髙 可以自动扫描吸收光谱续询3.双波长分光光度计/特点：利用吸光度差值定量 消除干扰和吸收池不匹配引起的误羞
