兽医分子生物学复习大纲

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1、兽医分子生物学复习大纲名词解释:选10个,每个2分反义疗法:引入与目的mRNA相补的RNA(反义RNA ),用于阻遏或降低某个基因的表达,达到治疗目的。元基因组(Metagenome):指的是自然环境中全部微生物的基因组,包含了可培养和未培养的微生物基因组。生物信息学:对DNA和蛋白质序列资料中各种类型信息进行识别、存储、分析、模拟和传输的科学。PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。Tm:热变性使DNA分子双链

2、解开所需温度称为熔解温度( melting temperature,简写Tm)。DNA的变性:在理化因素作用下,DNA双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链(双链单链),从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变的现象。退火:热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为“ 退火”(annealing)。复性:指变性DNA 在适当条件下,二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象(单链双链),它是变性的一种逆转过程。分子杂交(简称杂交,hybridization):是核酸研究中一项最基本的实验技术。其基本原理就是应用核酸分子的变性和复性的性质,使来源不同的DNA或RNA片段(标记的DN

3、A或RNA分子与待检测的靶DNA或RNA 分子),按碱基互补关系形成杂交双链分子。通过检测标记分子的标记信号,即可检测靶分子的存在。核酸探针(prob):是指带有某些标记物(如放射性同位素32P,荧光物质异硫氰酸荧光素等)的特异性核酸序列片段。在分子杂交中,通过标记后与靶分子结合,并检测靶分子的存在。基因:DNA分子中含有特定遗传信息的核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。或指合成有功能的多肽链或RNA所必需的全部核酸序列(通常是DNA序列)。重叠基因:核苷酸序列彼此重叠的2个基因为重叠基因,或称嵌套基因。卫星DNA(satelliteDNA):是一类高度重复序列,这类重复顺序的重复单位一般由

4、2-10bp组成,成串排列。由于这类序列的碱基组成不同于其他部份(一般富含A/T片断,浮密度较小),可用等密度梯度离心法将其与主体DNA分开,因而称为卫星DNA或随体DNA。基因家族 gene family:在真核生物基因组中来源相同、结构相似、功能相关的一组成串排列在一起的基因,称为基因家族(gene family)。一些基因彼此靠近,成串地排列在一起,这种基因排列结构叫基因簇(gene cluster)。在基因家族结构中经常会看到基因簇结构。管家基因(housekeeping gene)-在一个生物个体的几乎所有细胞中持续表达的基因。奢侈基因(luxury gene)只在特定的细胞类型中表

5、达的基因。组成性基因表达:无论表达水平高低,管家基因较少受环境因素影响,而是在个体各个生长阶段的大多数或几乎全部组织中持续表达,或变化很小。区别于其他基因,这类基因表达被视为组成性基因表达(constitutive gene expression)。可诱导基因:在特定环境信号刺激下,相应的基因被激活,基因表达产物增加,这种基因称为可诱导基因。可阻遏基因:如果基因对环境信号应答是被抑制,这种基因是可阻遏基因。协调表达:在一定机制控制下,功能上相关的一组基因,无论其为何种表达方式,均需协调一致、共同表达,即为协调表达(coordinate expression),这种调节称为协调调节(coordi

6、nate regulation)。弱化子:在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列,称为弱化子。增色效应或高色效应(hyperchromic effect):指变性后DNA 溶液的紫外吸收作用增强的效应。外显子extron:成熟的mRNA或蛋白质中存在的序列。(在DNA或mRNA中都存在的序列)内含子intron:在DNA上存在,而在mRNA(或cDNA)中不存在的序列,初级转录产物加工成成熟mRNA时被切除的间隔序列。转位因子:能够进行复制并将一个拷贝插入新位点的DNA序列。(能在基因组中移动的DNA序列叫转位因子),由于它可以从染色体基因组上的一个位置转移到另一个位置,甚至

7、在不同的染色体之间跃迁所以又称跳跃基因(jump-gene)。操纵子(operon):原核生物中几个功能相关的结构基因成簇串联排列组成的一个基因表达的协同单位(DNA序列)。操纵子是一种完整的具有特定功能的细菌基因表达和调节的单位,包括结构基因,启动序列,操纵序列,调节基因,组成一个控制单元。感受态细胞:指容易接受外源DNA进入,从而获的特异生物学性状的细胞。融合基因:通常是指通过自发突变事件形成的、或是应用DNA重组技术构建的、一类具有来自两个或两个以上不同基因的核苷酸序列的新型基因。融合蛋白质:由克隆在一起的两个或数个不同基因的编码序列组成的融合基因,转译产生的单一的多肽序列。它们的功能往

8、往是异常的,或者是已经发生了变化。单顺反子(monocistron):即一个基因编码一条多肽链或RNA链,每个基因转录有各自的调节元件,一个启动子后仅具有一个编码序列。 多顺反子mRNA:在原核细胞中,通常是几种不同的mRNA连在一起,相互之问由一段短的不编码蛋白质的间隔序列所隔开,这种mRNA叫做多顺反子mRNA。可编码两条或两条以上蛋白质分子的mRNA的分子。转化:质粒或其它基因工程载体进入原核宿主细胞的过程。单位限制性内切酶:在最佳缓冲系统和20l体积中反应1小时,完全水解1gDNA所需的限制性内切酶量。 质粒(Plasmids):是存在于细菌细胞质中独立于染色体而自主复制的共价、封闭、

9、环状双链DNA分子(Covalently closed Circular DNA, ccc DNA),并不是细菌生长所必需的,但可以赋予细菌某些抵御外界环境因素不利影响的能力。载体:外源DNA片段要进入细胞(受体细胞),并在其中进行复制与表达,必须有一个适当的运载工具将其带入细胞内并载着外源DNA一起进行复制与表达。这种运载工具称为载体(vector)。肽核酸(PNA, peptide nucleic acid):90年代丹麦科学家发明的一种全新的DNA类似物,以N-(2-氨基乙基)甘氨酸肽键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架,能特异性地识别与DNA、RNA所形成的杂交体。限制性内切酶多态性分

10、析(RFLP Restriction Fragment Length Polymorphisms):每一限制性核酸内切酶在切割DNA分子时都有固定的切点序列,DNA分子中核苷酸排列顺序的变化有可能使该切点丢失或增加。由于不同生物群体的DNA序列千差万别,因而用同一限制性内切酶消化后,所得DNA片段的长度分布也是千变万化的。因此,其可用于临床遗传性疾病的基因诊断、生物群体的遗传分析。单链构象多态性分析(SSCPSingle strand conformation polymorphism):单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象,这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的,当有一个

11、碱基发生改变时,会或多或 少地影响其空间构象,使构象发生改变,空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰胺凝胶中迁移率不同。问答题(选8个题,取其中的6个回答,共50-60分)1、分子生物学的基本含义与基本原理是什么?(一)分子生物学是研究生物大分子结构与功能的一门学科,即从分子水平阐明生命现象和生物学规律的科学。广义的讲,一切从分子水平研究生命奥秘的研究工作都是分子生物学。(二)分子生物学的基本原理分子生物学的三大原则:第一:构成生物体的有机大分子的单体在不同生物体内都是相同的:共同的核酸语言,共同的蛋白质语言。第二:生物体内一切有机大分子的构建都遵循共同的规律;或者说:生物遗传信息表达的中心

12、法则相同。第三:某一特定生物体所拥有的核酸及蛋白质决定了生物的属性。生物大分子单体的排列(核苷酸、氨基酸)是不同的。2、DNA的变性的含义是什么,变性会引起DNA哪些理化性质的变化?(一)概念:在理化因素作用下,DNA双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链(双链单链),从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变的现象。(二)理化性质的变化(1)溶液粘度降低 n DNA双螺旋是紧密的“刚性”结构,变性后代之以“柔软”而松散的无规则单股线性结构,DNA粘度因此而明显下降。(2)沉降速度变慢;由于变为单链后,密度下降,导致沉降速度变慢。(3)溶液旋光性发生改变 变性后整个DNA分子的对称性及分子局部

13、的构性改变,使DNA溶液的旋光性发生变化。 (4)增色效应或高色效应 原因:DNA分子具有吸收250280nm波长的紫外光的特性,其吸收峰值在260nm。DNA分子中碱基间电子的相互作用是紫外吸收的结构基础,但双螺旋结构有序堆积的碱基又“束缚”了这种作用。变性DNA 的双链解开,碱基中电子的相互作用更有利于紫外吸收,故而产生增色效应。 3、影响DNA变性的因素有哪些? (1) 温度:温度越高,越有利于核酸变性。(2)碱基组成G/C含量越高,变性温度越高。均质DNA变性温度范围小,异质DNA变性温度范围大 。 (3)离子强度:高盐利于稳定,低盐利于变性。离子强度高,Tm值高,变性温度范围较窄;离

14、子强度低,Tm值低,变性温度范围较宽。(4)强酸强碱:极端的pH有利于核酸变性。(5)变性剂:变性剂如甲醇、乙醇、甲酰胺、尿素、甲醛等破坏氢键,妨碍碱基堆积,破坏双螺旋结构引起核酸分子变性,使Tm下降。(6)DNA的长度DNA长度越大,变性时需要持续的时间越长。4、简述病毒基因组的结构特点。1.基因组较小,大小差异较大;2.化学组成多样DNA病毒、RNA病毒;单链、双链;线状、环状;分节段、不分节段。3.基因重叠现象普遍存在实质:两个基因虽共用一段核苷酸序列,但其读码结构互不相同,编码不同的蛋白质。意义:使DNA的利用率提高,是基因表达调控的方式之一。4.结构简练大部分可编码蛋白质,只有非常小

15、的一部份不编码蛋白质(通常是基因表达的控制序列)(非编码序列较少);5. 基因组中功能基因丛集成一个或几个特定区域,形成一个功能单位或转录单元,即形成多顺反子结构。6. 除反转录病毒外,病毒基因组只有一个拷贝;7.有的病毒基因组中具有宿主细胞基因组的结构特点。5、细菌基因组的结构特点有哪些?1. 拟核(类核)结构;2. 存在多顺反子结构;3. 除RNA基因外,基本是单拷贝的:利于核糖体的快速组装,短时间内合成大量核糖体。4. 非编码序列相对较少;(相对于真核生物)5. 基因多是连续的;6. 存在不同的功能识别区:复制起始区、复制终止区等。6、真核生物核基因组特点有哪些?1. 基因组较大;低等真核生物:107-108 bp,较原核生物大10倍;高等真核生物:5X108-1010 bp,某些植物和两栖生物可达1011 bp;哺乳类生物大于2X109它们可编码100万个基因。2. 真核生物核DNA与蛋白质结合,形成核小体,再缠绕成染色质(染色体);3. 基因组一般为双倍体(diploid);4. 基因为单顺反子。 单顺反子:一个基因单独转录,一个基因一条mRNA,翻译成一条多肽链;5. 存在大量重复序列,重复次数可高达百万倍;6. 基因组中非编码序列多于编码序列,有大量的冗余DNA;7. 大部分基因有内含子,因此基因不连

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