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1、SPOT软 件 操 作 手 册一、图像获取功能用spot拍摄图像的操作流程1、调节显微镜，直到可以清楚地看到标本。2、将显微鉴定光路转换到拍摄状态。3、打开控制软件，点击屏幕右下角的拍摄协议窗口，选择一个合适的协议。4、点击窗口内（右上角）的LIVE图标，相机开始实时预览，你将看到要拍摄的区域。将焦 距调到最清楚（直接调焦，从显示器上就可以直接看到变化），然后关闭LIVE窗口。5、点击get image拍摄，拍摄后的图像出现在屏幕上，至此已经完成了一次基本拍摄。注意：1）开机顺序最好是先打开相机电源，再打开控制软件。2）拍摄时一定要注意显微镜的光路是否转换到拍摄状态。3）上一次所作的所有的参数
2、设置都会被计算机默认保留，所以拍摄前最好察看一下。4）spot 2及以前的型号没有LIVE功能。5）请确定滤光块的位置是否正确（明场时使用BF）SPOT软件提供的厂家设定协议可满足大多数拍摄环境，如果这些协议不能满足实际需要， 可对参数进行修改或建立自己的协议。二、建立自己的拍摄协议1、点击setup菜单，2、选取image setup。（以上两步也可以直接在屏幕右下脚菜单处点右键，选择Add）3、选取Add，选择拍摄的模式，如图darkfield-transnnitted lights Ijoreseerrce Nomarski DIC/HofJmaniy- pha?e cpntratS p
3、olarized lights brightfield-ieflected lights darkfield-reflectec! hgh愁: oiereo/rnacro-no gli巾宰:.fetereo/rnacro；shiny glints eo/nriacro-me tallic glint静Faclorv Defaults为协议取一个名字，5、设定各项参数6、点击确定，这是自己的协议将出现在屏幕右下角的协议窗口，以后拍摄时只须选中即可， 不必再惊喜逐项设定。三、设置拍摄参数操作流程1、点击setup菜单。2、点击image setup；（以上两步也可以直接在屏幕右下脚菜单处点左键，选
4、择modify）3、选取一个拍摄协议，点击modify。Biper Pixek-选取图像类型（8位单色/12位单色/24位RGB/36位RGB/48位RGB）拍摄彩色图像时，一般选择24位RGB,因为一般第三方软件均支持此方式。如果是拍摄荧 光，在滤光片的选择上最好选择要拍摄的荧光的颜色，这样速度快，图像质量好（例如拍摄 绿色荧光，则只选择绿色滤光片）Exposure%： &U选定曝光方式-自动/手动一般情况下，选择自动曝光，这样质量会比较好，方便调节参数。Auto-G ainW1上GAIN值所代表的意思是为CCD芯片中最亮的一点所容纳的电子数，其中1为容纳最多电子数，即满井电子数，2代表1/
5、2满井电子数，以此类推，16代表1/16满井电子 数。拍摄透射光时，可以选择任意值，推荐为8；拍摄荧光时，推荐使用1或2。Adjuslfnent调节曝光因子，数字越大，实际曝光时间越长适用于拍摄荧光，特别是以下情况：如果在拍摄的图像中有一点特别亮，其他的都很暗，并 且这个亮点是一个杂点或者不需要的，我们需要的则是那些暗的。这时我们就可以调节这个 值（如调节为2.3，它的意思就是在实际的曝光基础上再乘一个2.3的系数）这样再拍摄， 就会发现原来的亮点会曝光过度，但是原来不清楚的图像现在变得清楚了BINNING 选择光线弱时，可选定BINNING方式，以提高灵敏度，节省时间。数字越大，灵敏度越高，
6、推 荐拍摄弱荧光时使用2*2。选择时要注意以下情况：如果要做图像叠加，则一定要使用相同的Binning，否则图像会错 位！选择曝光顺序如果相机为3次曝光相机，则曝光顺序可以调整（特别是拍摄比较容易淬灭的荧光时），将 容易淬灭的荧光先拍摄。顺序即是RGB的各种组合（R-代表红色，G-代表绿色，B-代表蓝色） -Chip Imaging Area Fullfhip r选定芯片成像区域Full Chip整个芯片成像，Center中心区域成像，通过设定百分比决定区域的大小，Region设定成像区域的坐标。点击要采取的后处理方式，Spot会在获取图像之后对其进行相应处理后再显示在屏幕上。四、常用的拍摄技
7、巧1、在使用LIVE功能时，选择cortrol可以调节一些参数。（如预览图像显示的颜色，Binning 格式，图像的亮度速度与质量的关系等。其中在拍摄弱荧光时推荐Binning使用2*2或3*3， 亮度值可稍微调高一点，速度与质量的选择偏向于速度）注：这些参数的默认值一般为：bright为1.0，grama为1.42、拍摄时如果不想把整幅图片都拍下来的话，也可以这样作：先拍摄一幅图片，从中选择感兴趣的区域，用鼠标划出来，然后选择cameraSet Chip Imaging Region然后会出现对话框，点击OK，这样再拍摄时就会只拍摄你感兴趣的区域。注：做这些工作的前提是载物台一定不能动，如果
8、要拍摄另一个视野则先要把成像区域改为 full chip（做法如下：右键点击右下角的拍摄方案，选择modify，再选择full chip即可。）3、明场拍摄方案一般就使用默认的数据就可以了，拍摄荧光时，可能要做一些调整。例如 如果荧光比较暗或淬灭比较快，就可以把Bining改为2*2, Gain值改为2或4。4、白平衡功能（适用于明场拍摄）有时由于灯的缘故拍摄出来的图片会整体发黄或发蓝， 这个时候就可能要使用白平衡来解决问题。具体做法如下：在屏幕菜单中选择White Balance（右侧一个天平形状的图标），将载玻片聚焦好然后转移到一个空视野的区域，光路转到拍 摄状态，点击BeginOK即可。
9、注：白平衡与光的强度密切相关，光的强度变化了可能就需要做白平衡。5、平场校正-有时候拍摄出来的图片会四个角发暗，或由于镜头较脏，使得图片上一直有 一些暗斑，具体调整方法如下：首相将载玻片在目镜下聚焦好，然后拿走玻片，将光路转换 到拍摄状态，点击camera-Get Flatfield Image，相机自动拍摄，然后会出现对话框，给它 起一个名字点击ok就可以了。五、图像编辑功能1、图像增强使用图像增强功能可以提高图像质量，突出重点。做法如下：1）点击Edit菜单2）选取Adjust RGB或（HSL/HSV），再选定Adjust Histogram，移动滑动条（两个三角）来改 变图像显示效果；
10、这个操作主要是为了去掉拍摄时的噪音，使图像变得更清晰，后面的那个 三角向前拉会使图像变得更亮，在拍摄单色光的时候特别要调节一下，只选择单色光波峰所 在的区域，图像效果最好。3）选取Filter，可对图像进行平滑，锐化等操作。2、图像叠加1）点击Edit菜单，2）选定Merge Images；然后选择要叠加的图像，即白色框内的显示的位置，也可以从硬盘 上直接选择图像，将其合成一幅图像。该功能在拍摄多探针荧光图像等情况下非常有用。3、剪切图片1）在图片上选择感兴趣的区域用鼠标划出来，然后点击edit-crop即可。2）伪彩色填充3）有时我们拍摄荧光使用mono模式拍摄，但又想将他填充成单彩色图像。
11、（或选定 edit-Convert to grayscale，可将彩色图像转换成灰度图像，再选择change pixel bit depth，选 择8bit。）可以这样做选择edit-set palette就可以使用伪彩色来填充。4、伪彩色方案的设定系统已经给了4个默认设置，但有时不符合心意，此时我们就可以自己设置颜色方案。做法 如下：点击setup-palette-add在左侧的调色板上选择符合心意的颜色，然后为它起一个 名字，点击OK。使用时在set palette里的下拉菜单里就有你自己设的方案，就可以直接使 用，如果觉得颜色不符合心意，还可以修改，步骤是setup-palette-选择
12、要修改的方案的 名字-modify就可以修改了。六、图像测量功能Spot提供了方便的测量功能，可直接再画面上进行测量并显示出实际测量值，在测量之前， 需要先进性校准。1、校准1）先拍摄一张定标尺的图像2）点击setup菜单3）选定Calibration Setup，出现对话框；4）选定Add5）为将要建立的标准取一个名字（最好是显微镜的物镜倍数）6）将光标放在图像上，此时光标变成十字，在定标尺图像的某一位置点击，再将光标移到 另一位置点击；最好是包括整数个一黑一白跨度7）在对话框最后一行键入实际长度和单位，（一般一黑一白代表100个微米）8）点击OK。2、添加比例尺1）点击 edit-add
13、calibration mark2）选择拍摄时的物镜倍数，然后在要加比例尺的图像上用鼠标左键点一下，就可以将比例 尺加到图像上，要保存点击stamp。比例尺的大小，方向，颜色，位置，线条的粗细，都可 以调整，方法如下：在对话框上直接选择要修改的对象，调整即可。注：在做操作前最好将原图保留，因为一旦最后存储之后，将没有办法再修改3、测量1）点击Edit菜单2）选取Add Measurement，出现对话框3）选定一个测量标准（一般为拍摄时的物镜倍数）4）选定测量类型（直线距离/角度/曲线距离/区域面积）5）在图像上移动，点击鼠标即可进行测量，结果会显示在图像上；6）如果想保留测量结果，点击对话框
14、上的Stamp即可。注：在作操作前最好将原图保留，因为一旦最后存储之后，将没有办法再修改。七、图像标注功能Spot的图标标注功能可在图像上添加箭头，线条，矩形，文字，图片，水印，拍摄日期， 备忘率等元素，将图像做必要的描述，突出重点，方便发表和查阅。1、选择标注工具1）点击Edit菜单2）选定Add Annotate，此时屏幕上方菜单发生改变，出现Object，Attribute， Done三个新 选项。3）点击 Obiect4）选定自己需要的元素或选择view-show tools来使用快捷菜单，在图像上拖动鼠标，即 可将其添加在图像上。2、改变工具样式1）如果对某工具的样式不满意，点击At
15、tribute2）选定要修改的工具，设定其参数即可3）在图像上标注完成之后，点击Done，保存所做的操作，即可恢复原来的菜单。3、添加备忘录可以将这张图片与其它片子的不同之处记下来，方便以后查阅，对比等。文字将会与图片一 起保存为一个文件。以后只要打开图片点击meno即可看见以前写的记录，并且可以任意修 改，具体做法如下：点击edit-meno,将所有信息写下即可。八、常见问题及解决方法屏幕提示 Exposure time is too short原因：光线太强解决：将光源调弱即可。或使用挡光片等。屏幕提示 Image too dim原因：可能是光线太暗解决：将光强调亮即可，也可能是由于没有将显微镜的光路转换到拍摄状态。一直计算曝光时间，不进行其他操作原因：显微镜的目镜与VIDEO端口的切换拉片没有拉出，相机没有感光或是由于拍摄时没有将光路转换到拍摄状态解决：将拉片拉出即
