常用培养基及添加剂的配制

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1、1 .牛心脑浸汁-辅助琼脂:(BHI-S)100mLBHI琼脂氯化血红素-维生素K11mL脱纤维蛋白血(兔血)5-10mL2. 胰蛋白水解物-大豆琼脂(TS)胰蛋白水解物(或胰蛋白胨)1.5g大豆胨0.5gNacl0.5g酵母提取物0.5g盐酸半胱氨酸液0.4mL琼脂2.0g蒸馏水加至100mL3. Gifu厌氧培养基:(GAM)胰蛋白胨1.0g大豆胨0.3g多价蛋白胨1.0g酵母提取物0.5g肝浸汁10mLVPI盐溶液0.2g牛肉浸膏5mL盐酸半胱氨酸0.4mL旅基乙醇酸钠0.03g葡萄糖1.0g琼脂1.8-2.0g刃天青(0.1%)0.5g蒸馏水加至100mL4. Rogosa乳杆菌选择培

2、养基(LS)胰蛋白水解物(或胰蛋白胨)2.0g酵母提取物1.0g琼脂4g葡萄糖4.0g(储存液)磷酸二氢钾1.2g12g枸橼酸三铵0.4g4g硫酸镁(MgSo4 7H2O)1.0g10g硫酸锰(MnSo4 4H2O)0.4g4g硫酸亚铁(FeSo4 7H2O)0.08g0.8g醋酸钠(CH3COONa 3H2O)(乙酸钠)5g50g冰乙酸(99.5%)0.264mL2.64mL聚山梨酯-800.2g2gDH2O200mL200mL (每100mL培养基加10mL)5. TPY培养基胰蛋白胨3.0g酵母提取物0.8g葡萄糖2.0g磷酸二氢钾1.2gK2HPO4 3H2O0.4gNaCO30.4g

3、NaCl0.4gDH2O200mL琼脂2.5g /200mL6.普通血琼脂培养基(BA)牛肉浸膏(0.5-1.0) g蛋白胨1.0gNaCl0.5gK2HPQ2.0g酵母提取物0.5g葡萄糖1.0g琼脂1.8g蒸馏水加至100mL7. 轻唾培养基(MS)胰蛋白胨示胨蔗糖葡萄糖K2HPO4 3H2O琼脂0.1%曲利本蓝0.1%结晶紫蒸馏水加至8. 轻唾-杆菌肽琼脂(MSB)MS琼脂(蔗糖含量为20%)1.0g0.5g3-5g (可根据需要将蔗糖量增至20g)0.1g0.53g2.0g7.5mL0.8mL100mL100mL0.1mL杆菌肽溶液(200U/mL) 灭菌MS琼脂50C左右时加入杆菌肽

4、溶液,混匀倒板9. 轻唾-磺胺二甲嘧啶琼脂(MS磺胺琼脂)MS 琼脂100mL*磺胺二甲嘧啶(5%)1.0mL*1%的亚碲酸钾溶液0.28mL灭菌MS琼脂冷却至25 C时加入*10. TYCSB 琼脂胰蛋白酶水解物1.0g酵母提取物0.5g盐酸半胱氨酸溶液0.4gK2HPO4 3H2O0.53g蔗糖20g琼脂2gDH2O100mL灭菌后冷却至50-55C时加入杆菌肽溶液(200U/mL) 0.1mL,混匀倒板11. Rogosa乳杆菌选择培养基(LS)胰蛋白水解物(或胰蛋白胨)1.0g酵母提取物0.5g磷酸二氢钾0.6g枸橼酸三铵0.2g葡萄糖2.0g硫酸镁(MgSo4 7H2O)硫酸锰(Mn

5、So4 4H2O)硫酸亚铁(FeSo4 7H2O)醋酸钠(CH3COONa 3H2O)(乙酸钠)冰乙酸(99.5%)0.5g0.2g0.04g2.5g0.132mL聚山梨酯-800.1g琼脂1.8gDH2OLS盐溶液的组成:100mLMgSo4 7H2O5.57gMnSo4 2H2O1.20gFeSo4 7H2O0.34gDH2O50 mL混合上述成分并加热使之溶解。高压(121C )灭菌15分钟备用。100mL乳杆菌选择培养集中加入0.5mL LS盐溶液即可12. 放线菌分离和富集培养基:1) Beigheor-CoIman 培养基:(FC)BHI基础培养基100mL聚乙烯毗咯烷酮1.0g盐

6、酸半胱氨酸0.4mL琼脂1.8g灭菌冷却至50C左右加入无菌氟化钠溶液(25g/L) 1mL,硫酸粘菌素溶液(1g/L) 0.5mL,无菌马血清5mL,混匀倒板2)明胶-甲硝唑-硫酸铬选择培养基(GMS)营养明胶琼脂100mL硫酸铬(CdSO4 8H2O)溶液(2g/l)1.0mL甲硝唑(lg/1) 1.0mL将上述成分(除甲硝唑外)混合并加热使之溶解,高压(121 )灭菌15min,待冷却至50C 左右加入无菌甲硝唑溶液1mL,混合均匀后倾注于平板。3) Tarozzi肉汤培养基牛肉浸汁50mL蛋白胨1.2gNacL0.3gK2HPO40.2g混合上述成分并补充蒸馏水(加热至80C左右)至1

7、00mL,煮沸10min,冷却后校正PH值为 7.5,用罗素暗管(15mm*150mm分装,每管8mL,然后加入0.1%的硫基乙醇酸钠溶液2mL 和新鲜的豚鼠或牛肝切割片(2cm1cm 1cm大小并经盐水洗净)。最后将装有上述物质的螺 旋管高压(121C )灭菌15min后备用13. 韦荣球菌选择琼脂:(VS)胰蛋白酶水解物0.5g酵母提取物0.1g硫基乙醇酸钠0.075g50%的乳酸钠溶液(2.0-2.5) mL聚山梨酯-800.1g琼脂2.0gDH2O100mL混合上述成分并加热使之溶解,待冷却后调PH为7.8, 115C20min或121C 15min高压灭 菌。待冷却至50-55C时,

8、加入万古霉素溶液(7.5mg/L) 1mL和脱纤维兔血或马血5mL混 合均匀并倾注平板备用说明:1)不含万古霉素和琼脂的乳酸盐培养基可作为韦荣球菌的富集培养基2)用新霉素(100mg/1)代替万古霉素加入乳酸盐琼脂中,组成韦荣球菌-新霉素琼脂,可 用于分离韦荣球菌。但要注意,其它两种革兰氏阴性厌氧球菌(发酵氨基酸球菌和艾氏 巨球菌)均可在此培养基上生长14. 拟杆菌选择琼脂(KVB琼脂)BHI 琼脂100mL氯化血红素-维生素K1溶液1.0mL卡那霉素储存液1.0mL万古霉素储存液1.0mL无菌脱纤维动物血5mL将BHI琼脂融化并冷却至50左右,加入其它几种成分混匀后倾注于平板备用说明:1)K

9、VB琼脂还可用TS琼脂或布氏菌血琼脂作基础,配制方法同上2)用冻融血代替脱纤维马血或兔血配制成卡那霉素-万古霉素溶血琼脂(KVL-BA),这种拟杆菌选择培养基也可用于普雷沃菌和卟啉单胞菌,并有利于产黑色素细菌落的形成3)在KVBA琼脂和KVLBA琼脂上,除拟杆菌属细菌可生长外,二氧化碳噬纤维菌也可生 长15. 拟杆菌胆汁七叶苷琼脂(BBE)TS琼脂或BHI琼脂100mL牛胆盐2g七叶口甘0.1g*枸盐酸铁胺0.05g*Hemein (5mg/mL)0.2mL*庆大霉素溶液(40mg/mL)0.25mL*消毒后冷却至50r左右加入16. 梭杆菌培养基1)梭杆菌选择琼脂(FS)BHI琼脂培养基10

10、0mLFS添加液1.0mL将BHI琼脂100mL加热使之融化,待冷却至55C左右加入FS添加液混匀并倾注于平板FS添加液的配制:35mg结晶紫溶于越40mL蒸馏水中并加热煮沸灭菌,待冷却至50C左右加入硫酸新霉素 150mg,万古霉素25mg.混匀后置冰箱内保存2)梭杆菌选择培养基(CVE)胰蛋白胨1.0g酵母提取物0.2gNaCL0.5gK2HPO4 3H2O5g可溶性淀粉2.0g盐酸半胱氨酸0.05g琼脂2.0g结晶紫溶液(5mg/mL)0.1mLDH2O100mL17. 颊纤毛菌分离鉴定培养基1)结晶紫红霉素琼脂(CVEA)胰蛋白酶水解物1.0g酵母提取物0.5gNaCl0.5g葡萄糖0

11、.2g色氨酸0.02g琼脂1.8-2.0g结晶紫溶液(5g/l)0.1mLDH2O100mL高压灭菌冷却至50-55,加入红霉素溶液(4g/L) 0.1mL和脱纤维兔血5mL,混合后倾倒平板2)Kasai培养基胰蛋白胨1.0g酵母提取物0.2gNaCl0.5gK2HPO4 3H2O5.0g可溶性淀粉2.0g盐酸半胱氨酸0.05gDH2O 100mL18. WFF琼脂培养基(沃林菌属鉴别培养基)胰蛋白酶水解物(BBL)1.5g酵母提取物0.5g丙酮酸钠0.2g甲酸钠0.15g琥珀酸钠0.01g延胡索酸纳0.015gNacL0.5g琼脂2.0gHemein (500mg/mL)1.0mLDH2O1

12、00mL19.伴放线放线杆菌选择琼脂1) TSBV琼脂TS琼脂100mL*马血清10mL*杆菌肽溶液(7.5g/L)1.0mL*万古霉素溶液(0.5g/L)1.0mL*TS琼脂高压灭菌后冷却至50-55T左右加入杆菌肽溶液,万古霉素溶液和无菌马血清,混合均匀后倾注于平板2)TSMB琼脂TS琼脂100mL*孔雀石绿溶液(8g/L)0.1mL*杆菌肽溶液(12.8gL)1.0mL*脱纤维羊血(或马,兔血)5.0mL*将TS琼脂高压灭菌后冷却至50-55左右加入孔雀石绿溶液,杆菌肽溶液和脱纤维血,混 合后倾注平板20.克林霉素-硝酸盐(CKA)BHI琼脂100mLKNO3 溶液(200g/L)1.0

13、mL克林霉素溶液(50mg/L)1.0mLHenein (500mg/L)1.0mL注意:将BHI琼脂加热并使之融化后立即加入KNO3溶液和氯化血红素溶液混匀,待冷却至50 r左右时加入克林霉素溶液混匀倾注于平板21. TPY培养基(双歧杆菌分离选择培养基)胰蛋白酶水解物1.0g植物胨0.5g葡萄糖0.5g酵母提取物0.25g聚山梨酯-800.1mL盐酸半胱氨酸0.05gK2HPO40.2gMgCl26H2O0.05gZnSO4 7H2O0.025gCaCl20.015gFecl3微量琼脂1.5-1.8gDH2O100mL注意:混合上述溶液高压灭菌,PH6.5,待冷却至50-55时加入卡那霉素,新霉素和草履 虫霉素22. 改良双歧杆菌选择琼脂(BSA)番茄汁20mL蛋白胨1.5g酵母浸膏0.6g葡萄糖2.0g可溶性淀粉0.05g聚山梨酯-800.1gNacl0.5g琼脂2.0gDH2O80mL注意:混合上述溶液高压灭菌,PH6.8,待冷却至50C时加入BS添加液5mL.(PB配方见附录 培养基常用溶液。添加液及抗生素药物溶液的配置)23. 优杆菌选择培养基:(改良ES)BHI 琼

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