木糖苷酶活性的测定方法

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1、0.80.70.60.6s 0-5R =0.9997木糖苷酶活性的测定方法。-木糖昔酶活性是由从底物对硝基苯酚-P-D-木糖昔(pNPX, Sigma)释放出 对硝基苯酚(pNP)的量来确定的。采用分光光度法50。测定体系总体积为800四L， 反应体系为 200|iL，内含 10|iL 20mmol/L 底物 pNPX、185L 100mmol/L pH6.0 的邻苯二甲酸氢钾-咪哇缓冲液、5四L适量稀释粗酶液，于65C反应5min,然后加 入600四L 1mol/L的Na2CO3溶液终止反应并显色，在405nm处测定光吸收值的 增加量。一个酶活单位定义为在该反应条件下，lmin内催化产生1四

2、mol的对硝 基苯酚所需要的酶量。用对硝基苯酚作标准曲线51.用对硝基苯酚(pNP)作标准曲线，具体方法:木糖昔酶对人工底物对硝基苯酚 -P-D-木糖昔(pNPX，Sigma)水解后的产物为对硝基苯酚(pNP)，碱性条件下它在 405nm处有明显的光吸收值。配制浓度为1四mol/m1的对硝基苯酚，然后用不同 体积的对硝基苯酚和水混匀，使二者总体积为200四L，最后用同样的1mol/L的 Na2CO3终止显色，在405nln处测吸光值，pNP的量与A405成线性关系(图2-l)。y = 23.536x+ 0,0007R 二 0.999700.0050.010.0150.020.0250.030.035pNP ( u mol)封梢基苯酚标准曲线Standard curve ofp-nitrophenyl线性回归后得到A4O5 一 pNP (皿E)标准曲线方程为:对硝基苯酚的量(tunol)吸光度A4(15