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1、同期罗汉果植株不同部位黄酮含量测试研究食品加工技术论文 【摘要】以罗汉果植株为试材，采用甲醇水浴回流提取黄酮，除去掉滤渣，在滤液中加盐酸溶液,进行回流水解，采用高效液相色谱测定罗汉果植株各部位黄酮的总含量，实验结果说明：罗汉果植株不同部位总黄酮含量由高到低的排列顺序是：牙叶、中叶、上叶、下叶、中茎、下茎、芽茎、上茎、根，形成由上至下、由外至内递减的规律。 【论文关键词】罗汉果；黄酮含量；分布规律；液相色谱1前 言罗汉果(Siraitia grosvenoriiSwingleC.Jeffrey)，又叫假苦瓜，为葫芦科罗汉果属植物，已广泛用于医药、饮料和食品中，前人的研究主要集中罗汉果的果实，近年
2、来陈全斌等对罗汉果叶黄酮进行了研究 19 ，但对同时期罗汉果植株不同部位黄酮含量分布规律研究未见报道。因此本文采用HPLC 法测定同时期罗汉果植株不同部位中黄酮甙的含量,寻找出总黄酮含量的分布规律及其甙元槲皮素和山奈酚的比值关系并进行分析讨论。2试验局部2.1材料与试剂罗汉果植株样品：2022年11月采于桂林龙胜。罗汉果植株不同部位的划分：把整个植株划分为上中下和根四大局部，其中上部由外向内、从上而下划为：芽叶、芽茎、上叶、上茎；中部由外向内、从上而下划分为：中叶、中茎、中叶、中茎；下部划分为：下茎；中部由外向内、从上而下划分为：中叶、中茎、中叶、中茎；下部划分为：下叶、下茎不同部位间隔约50
3、cm，根部由上而下划分为：根、根、根,其中根和根埋于地下间隔约20cm。甲醇A.R、盐酸A.R、乙醇A.R、槲皮素及山奈酚对照品中国药品生物制品检定所。2.2 仪器P200型高压液相色谱仪大连依立特，包括P200 型高压恒流输液泵、Echrom98色谱工作站；色谱柱：Hypersil C185m，4.6mm250mm。2.3色谱条件流动相： V甲醇:V水:V磷酸60:40:0.3；流速：1.0mL/min；检测波长：360nm；灵敏度：0.05；柱温：4024 样品处理罗汉果植株不同部位阴干捣碎称取1.0000 g的枯燥样品用甲醇水浴加热回流2h过滤后弃去滤渣滤液加1:1盐酸溶液，水解1小时冷
4、却甲醇定容为50mLHPLC测定。2.5 总黄酮含量的测定2.5.1 标准样品的测试准确吸取混合标准溶液槲皮素0.097mg/mL和山奈酚(0.448mg/mL)10L进样，重复3次。图1 标准样品色谱图1.槲皮素,2.山奈酚以下图同2.5.2 样品测试准确吸取待测溶液10L, 重复进样3次，测定黄酮甙元槲皮素、山奈酚色谱峰面积积分值，并以外标法计算其含量。同时期罗汉果植株不同部位中的黄酮甙元槲皮素与山奈酚平均含量见表1。局部样品色谱图见如下图2、图3、图4和图5。2.5.3 总黄酮含量的计算罗汉果植株各部位总黄酮甙含量槲皮素含量2.05山奈酚含量2.023 结果与分析3.1 结果表1 罗汉果
5、植株各部位黄酮及其甙元相关数值部位含量 (%)甙元比值槲皮素:山奈酚槲皮素山奈酚总黄酮根0000根0.00100.03570.07410.027根0.05080.10370.31360.490下茎0.26450.59361.74130.446中茎0.00960.26850.56210.036中茎0.00110.95441.93020.012上茎00.68921.39200芽茎00.73011.47490牙叶02.83705.73120上叶0.20501.61923.69100.13中叶0.30261.66503.98410.18下叶f0.33701.38023.47900.243.2分析3.2
6、.1 同时期罗汉果植株各部位总黄酮含量的变化由表1可以看出，罗汉果的根部末端埋于地下，不见阳光中的黄酮含量为零；罗汉果植株中根茎叶部位黄酮含量的上下顺序为：牙叶5.7312%、中叶3.9841%、上叶3.6910%、下叶3.4790%、中茎1.9302%、下茎1.7413%、芽茎1.4749%、上茎1.3920%、中茎0.5621%、根0.3136%、根0.0741%、根0.0000%。可见，在整个植株中不同部位的总黄酮含量变化较大。罗汉果叶中的总黄酮含量大致形成了从上到下递减的事实；茎的黄酮含量相差不是很大，中茎上部的总黄酮含量比其他茎部高，中茎下部含量较低，这可能是人为实验或是仪器误差所造
7、成的；茎的含量比根的要高，根部底端的含量较低。3.2.2 同时期罗汉果植株各部位黄酮甙元的含量变化在罗汉果植株中根部底端不含槲皮素和山奈酚；在芽叶、芽茎和上茎中只存在山奈酚，不存在槲皮素，其中芽叶的山奈酚最多，含量为2.8370%；芽茎次之，含量为0.7301%；上茎最少，含量为0.6892%；在上叶、中叶、下叶、中茎、中茎、下茎、根、根中均存在槲皮素和山奈酚，含量分别为：上叶0.2050%和1.6192%、中叶0.3026%和1.6650%、下叶0.3370%和1.3802%、中茎0.0096%和0.2685%、中茎0.0011%和0.9544%、下茎0.2645%和0.5936%、根0.0
8、508%和0.1037%、根0.0010%和0.0357%。3.2.3同时期罗汉果植株各部位黄酮甙元的比值比较在芽叶、芽茎和上茎中，只含山奈酚；其余均存在槲皮素和山奈酚，比值槲皮素：山奈酚分别为上叶0.13、中叶0.18、下叶0.24、中茎0.036、中茎0.012、下茎0.446、根0.490、根0.027。可见，槲皮素和山奈酚的含量悬殊，植株不同部位的黄酮甙元的比值波动较大，各个部位槲皮素的含量均比山奈酚要低。4讨 论黄酮类化合物是植物长期自然选择过程中产生的次级代谢产物。在成年的和衰老的组织中，在所有旺盛生长的细胞中都发生黄酮的不断合成、转化、降解。既受到自身的遗传因素和生理生化因素的影
9、响，也受到植物生长发育进程及其所处的生境条件的影响。在罗汉果的生长发育过程中，其细胞内不断发生黄酮的合成、转化或降解，使罗汉果植株各部位的黄酮含量变化显著。由于罗汉果各部位所处的微生境特别是光环境的不同以及它们生理功能的不同，使其总黄酮含量也不同，罗汉果植株中叶的黄酮含量明显高于茎和根的黄酮含量，茎部的黄酮含量又高于根部的黄酮含量。其中叶的黄酮含量与叶位有关，罗汉果叶中黄酮含量由上而下大致形成递减趋势。黄酮在植物体内合成代谢起源于光产物，根据光合产物具有就近分配的特性和顶端优势原理，导致嫩叶具有较高的黄酮含量。有报道认为当分生组织活泼时，黄酮合成较快12，也有报道认为，树龄或枝龄年轻时，黄酮含
10、量较高13-14，罗汉果植株各部位黄酮含量测定结果进一步证实了幼嫩部位黄酮含量高。罗汉果各部位总黄酮含量变化大致形成了由上向下、由外向内的递减趋势，这与各部位的生理功能有关，一方面幼嫩部位在植株外侧，接受光能较多，而黄酮类化合物在植物体内合成代谢起源于光合产物，所以，在幼嫩部位合成较多的黄酮。另一方面，幼嫩部位高含量黄酮有利于去除活性氧，免受强光及紫外线伤害，抵抗病菌的侵袭，同时黄酮又是生长调节剂，可促进生长和发育。黄酮在植物体内合成、转化、降解是一个复杂的过程，受多种因素的影响。黄酮类化合物在合成过程中，受多种因素制约，同时还伴随着转化和降解产生，所以黄酮类化合物是如何调节和控制罗汉果的生长
11、发育，促进繁育是一个复杂的过程，还有待进一步的深入研究。参考文献陈全斌,义祥辉.罗汉果黄酮及其制备工艺,中国. ZL202210110827.XP，2022.10.28.陈全斌,义祥辉.含有黄酮类化合物的新饮料，中国 ZL202210110826.5P，2022.10.28.陈全斌,杨建香,程忠泉.RP-HPLC法测定罗汉果叶中总黄酮含量J广西科学,2022,12 (1): 4345.陈全斌,杨建香,义祥辉.罗汉果叶中黄酮甙元的研究J广西植物,2022 ,26 ):217220.陈全斌,义祥辉,何星存.罗汉果叶饮料的可行性研究J饮料工业,2022,8:4727-30.陈全斌,杨建香,程忠泉等.
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