常用染色液的配方[致远书屋]

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1、一、常用染色液的配制 碘-碘化钾（I2-KI）溶液 能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。 配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ； 碘1g 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。 苏丹（sudan或）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。 配方：（1）苏丹III或苏丹干粉 ； 95酒精10ml ； 过滤后再加入10ml甘油 （2）先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。 （3）苏

2、丹III 70%乙醇的饱和溶液。 1醋酸洋红（aceto carmine） 酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。 配方：洋红1g ； 45醋酸100ml 煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4铁明矾溶液12滴（不能多加，否则会发生沉淀），放入棕色瓶中备用。 改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine） 核染色剂。 配制步骤： 先配成三种原液，再配成染色液。 原液A：3g碱性品红溶于100ml 70酒精中。 原液B：取原液A10ml加入到90ml 5石炭酸水溶液中。 原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林

3、（38的甲醛）。 （原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用） 染色液：取C液1020ml，加45冰醋酸8090ml，再加山梨醇1，配成1020浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著（若立即用，则着色能力差）。 适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用23年不变质。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用，假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。 中性红（neutral red）溶液 用于染细胞中的液泡，可鉴定细胞死活。 配方：中性红 ；蒸馏水100ml 使用时再稀释10倍左右。 曙红Y（伊红，eosin Y）酒精溶液 常与苏木精对染，能使细胞质染成浅红色，起衬染

4、作用。 配方：曙红 ； 95酒清100ml 也常用于95酒精脱水时，加入少量曙红溶液，其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料。 钌红（ruthenium red）染液 钌红是细胞胞间层专性染料，其配后不易保存，应现用现配。 配方：钌红510mg ； 蒸馏水25-50ml 龙胆紫（gentian violet） 为酸性染料，适用于细菌涂抹制片。 配方：龙胆紫0.21 g ；蒸馏水100ml 苯胺兰（aniline blue）溶液 为酸性染料，对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等，尤其是染丝状藻类效果好。还多用于与真曙红作双重染色，对于高等植物多用于与番红作双重染色。 配方：苯胺兰1 g

5、 ； 35或95酒精100ml 间苯三酚（phloroglucin）溶液用于测定木质素。 配方：间苯三酚5g ； 95酒精100ml 注：此溶液呈黄褐色即失效。 橘红G（orange G）酒精溶液 为酸性染料，染细胞质，常作二重或三重染色用。 配方：橘红G 1g ； 95酒精100ml 番红（safranin O）为碱性染料，适用于染木化、角化、栓化的细胞壁，对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色，与橘红G、结晶紫作三重染色。 配方：（1）番红水溶液番红0.1或1 g ；蒸馏水100ml （2）番红酒精溶液番红0.5或1 g ；50（或95）酒精

6、100ml （3）苯胺番红酒精染色液 甲液 番红5 g +95酒精50ml 乙液 苯胺油20ml +蒸馏水450ml 将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀，过滤后使用。 固绿（fast green）又称快绿溶液。为酸性染料，能将细胞质，纤维素细胞壁染成鲜艳绿色，着色很快，故要很好的掌握着色时间。 配方：（1）固绿酒精液固绿0.1 g ； 95酒精100ml （2）苯胺固绿酒精液固绿 1 g ；无水酒精 100ml ；苯胺油 4ml 配后充分摇匀，过滤后使用。现配现用效果好。 苏木精（hematoxylin）染液苏木精是植物组织制片中应用最广的染料，是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染

7、料，而且可以分化出不同颜色。配方很多，现举海登汉氏（Heidenhains）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。 配方：甲液（媒染剂）： 硫酸铁铵（铁明矾）2-4g ；蒸馏水100ml （必须保持新鲜，最好临用之前配制） 乙液（染色剂）：苏木精 0.5-1g ；95酒精 10ml；蒸馏水 90ml 配制步骤：（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。 切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。 铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但

8、要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。 亚甲基蓝染液 常用于细菌、活体细胞等的染色。 取亚甲基蓝，溶于100ml蒸馏水中即成。 詹纳斯绿B（Janus green B）染液 将 绿溶于100ml蒸馏水，配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。 硫堇染液 取克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末，溶于100ml蒸馏水中，即可使用。使用此液时，需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能成多色反应。 18.黑色素液 水溶性黑素10g，蒸馏水100mL，甲醛(福尔马林)。可用作荚膜的背景染色。 19.墨汁染色液 国产绘图墨汁40mL，甘油2mL，液体石炭酸2mL。先将墨汁用

9、多层纱布过滤，加甘油混匀后，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。用作荚膜的背景染色。 20.吕氏(Loeffier)美蓝染色液 A液：美蓝(methylene blue,又名甲烯蓝)，95%乙醇30mL; B液：。 混合A液和B液即成，用于细菌单染色，可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液，按110或1100稀释均可。 21.革兰氏染色液 (1)结晶紫(cristal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。 (2)芦戈(Lugol)氏碘液：碘1g，KI

10、2g，蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至300mL，即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色能使用。 (3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。 (4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g，95%乙醇10mL，5%石炭酸90mL)10mL，加蒸馏水90mL。 (5)番红溶液：番红O(safranine O，又称沙黄O)，95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。 以上染色液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G+ )或阴性(G- )细菌，前者蓝紫色，

11、后者淡红色。 22.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液：碱性复红溶于95%乙醇10mL中为A液；溶液100mL为B液。混合A、B液即成。 23.姬姆萨(Giemsa)染液 (1)贮存液：称取姬姆萨粉，甘油33mL，甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细，再逐滴加入甘油，继续研磨，最后加入甲醇，在56放置1-24h后即可使用。 (2)应用液(临用时配制)：取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液甲醇=14的比例配制成染色液。 24. 1%瑞氏(Wrights)染色液 称取瑞氏染色粉6g，放研钵内磨细，不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存

12、时间愈久，则染色色泽愈佳。 二、常用试剂的配制 (一)显微镜镜头清洁剂 将乙醚和乙醇按73混合，装入滴瓶备用。用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等（注意瓶口必须塞紧，以免挥发）。 (二)固定液 1.福尔马林-乙酸-酒精固定液（FAA，又称万能固定剂） 福尔马林（38甲醛）5ml冰乙酸5ml70酒精90 ml，可用于固定植物的一般组织，但不适用于单细胞及丝状藻类。幼嫩材料用50酒精代替70酒精，可防止材料收缩；还可加入5ml甘油（丙三醇）以防蒸发和材料变硬。FAA 可兼作保存剂。 2.福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA） 福尔马林5ml丙酸5ml70酒精90ml，用于固定一般的植物材料，通常固定24

13、h，效果比FAA 好，并可长期保存。 3.福尔马林-丙酸-氯仿固定液（卡诺固定液） 配方一：无水酒精3份冰乙酸1份。 配方二：无水酒精6份冰乙酸1份氯仿3份。 是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液，材料固定后，用95和85的酒精浸洗，清洗2-3次，也可转入70酒精中保存备用。 4.甘油-酒精软化剂 甘油1份50或70酒精1份，适用于木材的软化，将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中，时间至少一周或更长一些，也可将材料保存于其中备用。 5. 铬酸-乙酸固定液 根据固定对象的不同，可分强、中、弱3种不同的配方： 弱液配方：10铬酸2.5 ml10乙酸5.0 ml蒸馏水。 中液配方：10铬酸7

14、ml+10乙酸10 ml蒸馏水83 ml。 强液配方：10铬酸10 ml+10乙酸30 ml蒸馏水60 m1。 弱液用于固定较柔嫩的材料，例如藻类、真菌类、苔药植物和蕨类的原叶体等，固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12-24 h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟到1h。 中液用作固定根尖、茎尖、小的子房和胚珠等，固定时间12-24 h或更长。 强液适用于木质的根、茎和坚韧的叶子、成熟的子房等。为了易于渗透，可在中液和强液中另加入2的麦芽糖或尿素。固定时间12-24 h或更长。 (三)离析液 1. 铬酸-硝酸离析液 铬酸为三氧化铬的水溶液：(1) 10 ml铬酸；(2) 10 ml浓硝酸

15、。 将上述两液等量混合均匀后再使用。适于对导管、管胞、纤维等木质化的组织进行解离时使用。 2. 盐酸-酒精固定离析液 将浓盐酸、95酒精等量混合备用，一般用于离析根尖细胞。 (四)解离液 常用于根尖等细胞的涂片，它能使细胞壁中层（果胶质）溶解，而使细胞分开。 1盐酸酒精 配方:95%酒精 1份，浓盐酸1份。二者混合即成。 2盐酸溶液 （1）1 molL盐酸 配方：浓盐酸（比重） 用蒸馏水定容 1 000ml （2）L盐酸 配方：浓盐酸（比重） 用蒸馏水定容 1 000m1 盐酸水解时间对染色效果影响很大，水解时间短，易着色但较难压片；水解时间长，染色慢而色淡；超过20min或水解温度过高，往往染色极淡，或染不上色。各种材料最合适的时间有差别，一般来说，大染色体材料水解时间可较长，小染色体材料宜短。 改用L盐酸于60恒温下水解1015min，对各种类型材料都能获得细胞分离和染色合适的较好效果。 (五)预处理液 用于根尖压片的前处理，能使细胞有丝分裂染色体缩短。 1 8-羟基