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影响凝胶过滤层析的多种因素很多人以为凝胶过滤非常简单直接，无需花太多精神仔细优化。其实影响凝胶过 滤的参数非常多，现与大家分享几点经验：1层析柱必须有柱头及分布器，即adaptor，紧压胶面完合没有空隙，否则样品 上样受影响。2凝胶悬浮液不可太稠，否则很容易出气泡；太稀装柱时间过长，亦影响效果。50- 70%较适合。若是干粉，溶胀时间必须充足。装前完全搅匀。3 一次性倒入层析柱中，容量不够则需加装柱器。切不可分几次倒，柱效和对 称性都很难合格。4装柱及层析工作所用缓冲液的温度需一样。5柱底网下的气泡一定要除掉，可先用20%乙醇湿一下底网。6每种胶在不同柱高下的装柱流速、压力都不一样。跟足介质说明书的指引就 万无一失了！找不到查AKTA系统的Unicorn中主屏幕的adviser即可，也可以 查这光盘上有关层析凝胶的操作手册。7上样前柱平衡非常重要，不光UV平稳，至少平衡一个柱体积。8缓冲液pH值会影响分离效果，经验中用pH7.0和pH4.5的缓冲液分离5个低 分子量标准蛋白，结果颇有不同。9加入0.15M NaCl可防止非特异性的吸附及蛋白间的聚合。
