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1、1、植物组织培养：在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对植物 的胚胎、器官、组织、细胞、原生质体等进行离体培养，使其再生发育成完整植 株的过程。由于外植体已脱离了母体，植物组织培养又叫植物离体培养。2、植物组织培养的特点：无菌条件下进行；多数情况下是利用成分完全不确定 的人工培养基进行时；材料为离体状态；可以不断增殖，并通过调整成分控制实 验的目的；在封闭的容器中进行，气体通过封口材料进行交换；环境、温度、光 照强度都可人为控制。3、植物组织培养的类型：按培养对象分：植株培养：对完整植株材料的离体无菌培养；胚胎培养：从果实或子房中分离出成熟或未成熟的胚进行离体无菌培养的技术；器官培养
2、：以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养 技术；组织培养：对植物体的各部分组织如茎尖分生组织、形成层、木质部、 切皮部、表皮组织、胚胎组织和薄壁组织等，或对植物器官培养产生的愈伤组 织进行培养，二者均通过再分化诱导形成植株；细胞培养：对植株器官或愈伤组织上分离出的单细胞、花粉单细胞或很小的细胞团进行培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术；原生质体培养：对用酶、物理等方法除去植物细胞壁的、裸露的、有活性的原生 质体团进行培养的技术；按培养过程分：初代培养、继代培养；按培养基的物理状态分：固体培养、液体培养。4、植物组织培养在农林中的应用：植株离体快繁、无病毒苗木培育、次生代谢 物
3、的产生、培育新品种或创造新品种、植物种质资源的离体保存、人工种子、基 因工程的应用。5、外植体：植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。在继代培 养时，将培养的组织切段移入新的培养基时，这种切段也称外植体。6、愈伤组织：指在植物受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处产生 的一团不定形的薄壁组织。7、脱分化：指离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂， 逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组 织或成为未分化细胞特性的细胞的过程。8、再分化：离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成 另一种或几种类型的细胞、组织、器官
4、，甚至形成完整植株的过程。9、影响脱分化和再分化的因素：损伤、生长调节剂、光照、细胞位置、外植体 的生理状态、植物种类差异。10、细胞的全能性：指任何具有完整细胞核的植物细胞都拥有形成一个完整植株 所必需的全部遗传信息，在特定的环境下能进行表达，产生一个独立完整的个体。11、胚状体：在植物组织培养中，起源于一个非合于细胞、领过胚胎发生和胚胎 发育过程形成具有双根性的胚状结构叫胚状体。12、组培室地址的选择要考虑的因素：（1）首先要保证首先要保证水电供应；（2）为节约能源，充分利用自然光，试验室应向南建设，使采光面积和时数达到最大；（3）对于商业区性试验室，交通条件是否便利是一个应该考虑的因素；
5、（4）组培室最好避免建立在繁忙的交通线的附近；（5）避免与温室、微生物实验室、昆虫实验室、种子或其它植物材料储藏室相邻，以免由于空气流通造成难以克服的困难。13、组培实验室的基本组成渡，向小鼠工期入竹 丁实漆/如j 卡彳幺嶙多14、常用的生长素和分裂素有哪些种类？使用浓度范围如何？生长素类：IAA （呻咪乙酸）、旧A （呻咪丁酸）、NAA （蔡乙酸）、2,4-D （二氯 苯氧乙酸）、2,4,5-T （三氯苯氧乙酸）、ABT生殖粉。生长素一般溶于95%的酒 精或0.1mol/LNaOH （或KOH）溶液，后者的溶解效果更好。细胞分裂素类：6-BA （苇基腺口g吟）、2-ip （异戊烯腺喋吟）、Z
6、T （玉米素）、KT （激动素，味喃氨基喋吟）、人工合成具有细胞分裂素活性的物质TDZ （通常在0.002-0.2mg/L）。细胞分裂素一般溶于 0.5mol/L或1mol/L的HCL或稀的NaOH 溶液中。15、试述培养基配制的基本过程？按培养基配方及所需要的数量计算所需各成分的量，按计算好的量称凝固剂、 蔗糖。取出母液并按顺序摆好，准备好称量用的器具如量筒、烧杯、移液管、移 液器、玻璃棒等及溶解用的电磁炉、电炉等。在容器内装相当于所配置量1/3左右的纯水，根据计算的量加入琼脂溶煮或直 接加入琼脂粉，再根据计算出的母液添加量一次加入大量元素、微量元素、铁盐、 有机物、生长调节剂物质的母液及其
7、他特殊添加物，最后加入称量好的蔗糖并搅 拌均匀。加水定容至规定体积，搅拌均匀。加热引起的水分蒸发和温度变化均会引起培 养基体积变化，为了精确定容，可以先做好标记，在培养基熬煮好后按标记刻度 进行定容。调整培养基PH值。当培养基配制好以后，应立即进行 PH值的调整。直接用 PH试纸进行测定，根据不同植物要求调节培养基的PH值。PH通常用1mol/L的HCL或1mol/L的NaOH来调节，加入酸碱后应搅拌均匀再进行测定。分装已经配好的培养基应立即分装， 否则，凝固后难以分装，因为含琼脂的培 养基会在40c左右凝固。如果分装前培养基开始凝固，可在水浴中加热，使其重 新熔为均匀液态再进行分装。一般来说
8、，分装到培养瓶中的培养基应占培养的 1/4-1/3唯有，太多造成浪费，太少不易接种并影响培养材料生长。封口培养基分装后，应立即封口，以防污染。16、谈谈MS培养基的特点？无机盐含量较高，特别是硝酸盐和钱盐含量高，可满足植物组织生长发育对营养 元素的要求，但其不适合生长速度较慢、对无机盐浓度要求低的植物培养物。在 使用中，可以将MS培养基的大量元素减到原来的1/2、1/3甚至1/4,以降低无 机盐的含量。17、在组培中如何做好外植体的选择工作？(1)该外植体具有细胞全能性，这样才能达到组织培养的目的(2)选择带芽外植体茎尖的顶芽、腋芽、根和根茎的萌芽等带芽外植体非常适 合植物体的立体快速繁殖。(
9、3)选择胚胚带有极其幼嫩的分生组织细胞，非常适宜进行组织培养。(4)选择分化的器官组织 包括嫩茎、嫩叶、鳞片、形成层、根、花瓣、花萼以 及珠心等二倍体组织，在这类组织中，叶片和叶柄是常用的外植体，特别是新出 的叶片不仅分化和脱分化容易，而且污染少，操作方便。(5)还可以选择花粉及雌配子中的单倍体细胞，这些细胞里只有体细胞一半的 染色体，可以作为外植体进行组织培养。18、用于外植体灭菌的常用药剂有哪些？各其的特点如何？(1)酒精 是最常用的表而灭菌药剂，由于70%-75%勺酒精穿透力和杀菌能力最 强，在使用时，一般将外植体浸入其中 10-30S。酒精具有浸润和杀菌双重作用， 但不能达到完全灭菌，
10、必须与其他灭菌剂结合使用，通常作为灭菌的第一步，洒 精还可用于接种者的皮肤消毒及环境灭菌。(2)升汞即氯化汞，是有剧毒的重金属盐杀菌剂，其杀菌原理是 Hg+可与带负 电荷的蛋白质结合，使菌体蛋白质变性，酶失活。升汞使用浓度为0.%-0.2% 般浸泡6-12min,就可有效的杀死附着在外植体表面的细菌及真菌芽抱，通常用 无菌水至少冲洗5次。止匕外，氯化汞对人畜有机枪的毒性，操作不当会对人体造 成危害，废弃物处理不当也会引起环境污染。(3)次氯酸钠 是一种较好的表面灭菌剂，她可以释放出活性氯离子用以杀死细 菌。常用浓度为有效氯离子为1%,灭菌时间5-30min,处理后用无菌水冲洗4-5 次即可。由
11、于他分解出的氯气在灭菌后易除去，不残留，既有强杀菌力，又对植 物和人无害，对环境也没有污染。但次氯酸钠碱性较强，处理时间过长对植物组 织有一定破坏作用，在使用过程中应注意。(4)漂白粉 是一种常用的低毒高效杀菌剂，一般含10%-20%欠氯酸钙，使用浓 度一般为5%-10%或其饱和溶液。处理时间为20-30min,处理后要用无菌水冲洗 3-4次，漂白粉易吸潮散失有效氯二失效，故要密封贮藏，但不能贮藏太久，应现配现用。(5)双氧水 即过氧化氢，常用6%-12%勺双氧水溶液处理外植体材料，灭菌效 果相当好。双氧水在外植体表面容易除去，不会损伤外植体你，通常用于叶片的 灭菌。(6)新洁尔灭是一种广谱型
12、表面活性灭菌剂。它对绝大多数外植体伤害很小， 灭菌效果很好。通常用1:200的稀释液，刷洗，浸泡外植体 30min,甚至可以更 长的时间。19、外植体选择的基本原则是什么？(1)再生能力强 一般而言，分化程度越高的细胞，脱分化越难，再生能力越弱。 因此，在外植体的选择上，应该尽量选择未分化或者分化程度较低的植物材料， 一般情况下，年幼的组织比老的组织好，在取材季节上，尽量选择处于旺盛阶段 的材料。(2)遗传稳定性好 无论是大量繁殖还是遗传转化，保持原物种的优良性状是植 物组织培养的基本要求。因此，在选择外植体时，应选取变异少的材料。(3)来源丰富 为建立一个高效而稳定的植物组织培养体系， 往往
13、需要反复试验， 并要求结果有可重复性。因此，就需要外植体材料丰富并容易取得。(4)灭菌容易 在选择外植体时，应尽量选择带菌少的材料，减少培养中的杂菌 污染。通常植物地上组织比地下组织灭菌容易， 幼嫩的组织比老化和受伤的组织 灭菌容易，温室材料比田间材料带菌少，灭菌容易。在人工光照培养箱中萌发的 材料灭菌效果更好。(5)外植体大小 培养效果是一个外植体细胞总体对各个培养因子的综合反应， 因此外植体的表面积、体积、细胞数量等都会影响培养效果。 一般可以选择的外 植体的大小可以在0.5-1cm o外植体太大容易污染，过小不容易启动或启动后仅 仅产生愈伤组织或容易褐化死亡。在以植物脱毒为目的时，应选用
14、较小的外植体， 一般在0.2-0.5cm。如果外植体过大，则达不到脱毒的目的。20、简述外植体灭菌的一般过程？预处理：为了使植物材料消毒彻底，一般先用自来水冲洗 10min,表面不光滑或 长有绒毛难以洗净的材料，要冲洗1-2h,并且用洗衣粉或洗洁精溶液洗涤，必要 时用毛刷充分刷洗。灭菌：洗涤后的材料用滤纸吸干水分，然后浸泡于灭菌药剂溶液中，时间长短、 浓度高低则根据材料而定。一般宜选用两种灭菌剂交叉进行灭菌。例如先用70% 酒精浸10-20S,再浸入10%次氯酸钠溶液5-15min,随后用无菌水冲洗3-5次。 21、污染产生的原因有哪些？如何预防？原因：一是由于外植体材料表面消毒不彻底， 植物
15、材料带入培养过程，或是植物 的内生菌随培养材料带入培养过程；二是无蒸操作过程中初代培养的外植体带菌、 培养基和接种工具的消毒不彻底、接种室和超净工作台不符合要求、操作人员不 遵守操作规程、培养过程中环境的空气不洁净等。预防：选择植物材料：不同的植物材料种类和品种、 不同的取材部位、材料不同大小和 年龄以及不同取材时期，其带菌量均不同。应尽可能选择温室或人工气候室培养 的材料，田间采集的材料，可在温室条件下培养一段时间，使用新生长的部分； 木本植物的枝条取回后可插入水中使它萌动； 对于容易污染的材料，可在取材前 用杀菌剂、抗生素等预处理。严格消毒灭菌：对较难进行表面灭菌的材料可采用多次灭菌法，即
16、将切好的外植体放入某一种灭菌液中灭菌一段时间、 用无菌水冲洗3次；再放入另一灭菌液中 灭菌一段时间，这是二次灭菌法。这种方法既可达到彻底灭菌的目的， 又可减轻 灭菌液对外植体表面的伤害。也可用2种以上灭菌液分别浸泡处理，以增加灭菌 效果。对于组织内部所带的，难以杀灭的细菌，可以在培养中添加抗生素来解决。 规范操作，合理控制环境条件：接种室应保持清洁、干燥、密闭，定期用紫外线 灯照射、甲醛熏蒸、70%酒精喷雾等，操作人员注意手的消毒和操作规范。进行 大规模组织培养，最好安装空气过滤装置。22、愈伤组织培养含义？是指在人工培养基上诱导植物外植体产生一团无序生长的薄壁细胞组织及对其 培养的技术。23、愈伤组织形成分三个时期：诱导期、分裂期、分化期。24、胚状体
