饲料中粗蛋白测定方法1、原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有 机物，使含氮物转化成硫酸铵加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸 吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算 出粗蛋白含量2、试剂2.1硫酸（GB 625）:化学纯，含量为98%，无氮2.2混合催化剂:0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3 —920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀2.3氢氧化钠（GB 629）:化学纯，40%水溶液（m/V）2.4硼酸（GB 628）:化学纯，2%水溶液（m/V）2.5混合指示剂：甲基红（HG 3—958） 0.1%乙醇溶液，漠甲酚绿（HG 3—1220） 0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存 期为三个月2.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备2.6.1 盐酸标准溶液：c （HCl） =0.1mol/L8.3mL 盐酸（GB 622，分 析纯），注入1 000mL蒸馏水中2.6.2 盐酸标准溶液：c （HCl） =0.02mol/L1.67mL 盐酸（GB 622, 分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。
2.7蔗糖（HG 3—1001）：分析纯2.8硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥2.9硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1 000mL，加入0.1%漠甲酚绿乙 醇溶液10mL,0.1%甲基红乙醇溶液7mL,4%氢氧化钠水溶液0.5mL, 混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）3、 仪器设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵3.2分样筛：孔径0.45mm （40目）3.3分析夭平：感量0.0001g3.4消煮炉或电炉3.5滴定管：酸式，10、25mL3.6凯氏烧瓶：250mL3.7凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式3.8 锥形瓶：150、250mL3.9 容量瓶：100mL3.10 消煮管：250mL3.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动4、 试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化5分析步骤5.1.1试样的消煮称取试样0.5~1g （含氮量5~80mg）准确至0.0002g，放入凯氏 烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸 和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦 化，泡沫消失后，再加强火力(360〜410°C )直至呈透明的蓝绿色， 然后再继续加热，至少2h。
5.1.2氨的蒸馏：将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中， 冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液将半微量蒸馏装置 的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶 内蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸 馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸准确移取试样分解液 10〜20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口， 塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流 入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气蒸馏 4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏 水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏5.1.2.3蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按5.1.2步骤进行操作，测得 硫酸铵含氮量为21.19 + 0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤 是否正确5.1.3滴定用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用 0.1mol/L或 0.02mol/L (4.6.2)盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为 终点6、空白测定称取蔗糖0.5g,代替试样，按第5章进行空白测定，消耗0.1mol/L 盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。
消耗0.02mol/L盐酸标准溶液 体积不得超过0.3mL7、分析结果的表述7.1计算见下式：粗蛋白质(%) = (V2-V1)・cX0.0140X6.25/ (mXV' /V) X 100式中：V2——滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；V1——滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；c——盐酸标准溶液浓度，mol/L；m 试样质量，g;V——试样分解液总体积，mL；V——试样分解液蒸馏用体积，mL；0.0140——与 1.00mL 盐酸标准溶液〔c (HCl) =1.000mol/L〕相当 的、以克表示的氮的质量6.25——氮换算成蛋白质的平均系数7.2重复性每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为1%当粗蛋白含量在10%〜25%之间时，允许相对偏差为2%当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。