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1、传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！二十种常见实验动物模型一、缺铁性贫血动物模型缺铁性贫血（iron deficiency anemia，IDA）是体内用来合成血红蛋白（HGB）的贮存铁缺乏，HGB合成减少而导致的小细胞低色素性贫血，主要发生于以下情况：（1）铁需求增加而摄入不足，见于饮食中缺铁的婴幼儿、青少年、孕妇和哺乳期妇女。（2）铁吸收不良，见于胃酸缺乏、小肠粘膜病变、肠道功能紊乱、胃空肠吻合术后以及服用抗酸和H2受体及抗剂等药物等情况。（3）铁丢失过多，见于反复多次小量失血，如钩虫病、月经量过多等。IDA是一种多发性疾病，据报道，在多数发展中国家，约2/3的儿童和育龄
2、妇女缺铁，其中1/3患IDA，因此，研究IDA的预防和治疗具有重要的意义。在这些研究中，缺铁性贫血的动物模型（Animal model of IDA），又是实施研究的基础工具。常见的IDA动物模型的构建技术如下：实验动物：一般选用SD大鼠，4周龄，雌雄不拘，体重65g左右，HGB130g/L。建模方法：低铁饲料加多次少量放血法。低铁饲料一般参照AOAC配方配制，采用EDTA浸泡处理以去除饲料中的铁，饲料中的含铁量是诱导SD大鼠形成缺铁性贫血模型的关键，现有研究表明，饲喂含铁量15.63mg/Kg的饲料35天，SD大鼠出现典型IDA表现，而饲喂含铁40.30mg/Kg的饲料SD大鼠出现缺铁，但并
3、不表现贫血症状。建模时一般采用去离子水作为动物饮水，以排除饮水中铁离子的影响。少量多次放血主要用于模拟反复多次小量失血导致的铁丢失，还可以加速贫血的形成。放血一般在低铁饲料饲喂2周后进行，常用尾静脉放血法，11.5ml/次，2次/周。传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！模型指标：（1）HGB100g/L；（2）血象：红细胞体积较正常红细胞偏小，大小不一，中心淡染区扩大，MCV减小、MCHC降低；（3）血清铁（SI）降低，常小于10mol/L，血清总铁结合力（TIBC）增高，常大于60mol/L。需要指出的是，以上模型不能用于铁吸收不良相关IDA的防治研究。根据具体的研究需要，
4、也可以适当调整建模方法。二、白血病动物模型用免疫耐受性强的人类胎儿骨片植入重症联合免疫缺陷病(SCID)小鼠皮下，出于人类造血细胞与造血微环境均植入小鼠，建立具有人类造血功能的SCID小鼠模型称为SCIDhu小鼠。再将髓系白血病患者的骨髓细胞植入SCIDhu小鼠皮下的人类胎儿骨片内，植入的髓系白血病细胞选择性生长在SCIDhu小鼠体内的人类造血微环境中，即为人类髓系白血病的小鼠模型。SCID小鼠是由于其scid所致。T、B淋巴细胞功能联合缺陷，这种小鼠能接受人类器官移植物。传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！造模方法： (1) SCID-hu小鼠：CB-17 scid/sci
5、d 繁殖的近交小鼠(SCID)，68周龄时用抗生素处理。在无菌条件下，从1923 妊娠周龄的胎儿取出股骨和胫骨，剪成5mm mml mm的骨片，植入SCID小鼠皮下，并从每个胎儿供体制备胸腺细胞用于检测同种异体HLA。 (2) 白血病细胞注射：急性髓性白血病患者骨髓细胞(0.42) 104个活细胞(常用冻存解冻后的细胞)悬浮于含10胎牛血清的PM1640培养液20 d,用微注射器将细胞悬液直接注射人68周前植入SCID-hu小鼠的人胎骨片内。选择移植骨与白血病细胞的供体是HLA同种异型，便于追踪人肋骨移植片中细胞的来源。白血病细胞的体内传代：将已生长有白血病细胞的骨移植片再制备细胞悬液，取(0
6、.52)106个活细胞，注入第2个SCID-hu受体小鼠的移植骨片内。处理小鼠MHC-I(主要组织相容性复合体I类)抗原的单抗，直接与染料荧光素异硫氰化物或藻红蛋白结合，用流式细胞仪将细胞分类并分析细胞来源。 胎骨植入后23周时，骨片内有坏死与纤维化，CFUGM与BFUE减少，未见造血中心；移植45周时，骨片内出现由淋巴系与未成熟的髓系细胞组成的造血中心；68周后，植入胎骨片结构与正常胎儿造造血骨髓类似，并能维持正常造血达20周。用ME43(人类细胞抗原的特异抗体)与Ly5.1(小鼠血细胞的特异抗体)检测，植入骨片的细胞中人类细胞占70以上，而小鼠细胞仅占520。胎儿骨片内的人类基质细胞可刺激
7、人的造血干细胞的增殖与分化，以维持正常造血。将人的急性髓性白血病细胞注入SCID-hu小鼠的一块胎骨片内，46周后，胎儿骨片内的正常造血细胞被急性白血病细胞的增殖所取代，而且还选择性地转移到植入的其他胎骨片内。传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！该模型是人类白血病细胞生长在小鼠体内的人类造血微环境中，因此能更精确地用来研究人类自血病发病机制与对新疗法的评价，是目前研究白血病的最佳动物模型。该模型的建立原理与方法也适用于其他白血病与恶性肿瘤动物模型的建立。但应注意植入小鼠的胎儿骨片与成人骨舱造血钉些不同。三、支气管哮喘动物模型支气管哮喘是一种由肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T细胞等参
8、与的慢性气道炎症，伴有气道反应性增高及结构重建的疾病。对于敏感的人群，这种炎症引起喘鸣反复发作、呼吸困难、胸闷和咳嗽，尤其好发于夜间或清晨。这些症状常与广泛而有变动的气道阻塞相关，也可因气道对某些刺激物反应性增高而发生。国内目前使用的动物模型多数是卵蛋白致敏的豚鼠哮喘模型,卵蛋白作为致敏原进入动物体后，其可溶性抗原成分可以刺激机体产生IgE抗体，使机体致敏。当动物再次接触卵蛋白时，由IgE介导发生抗原抗体反应，使炎症细胞脱颗粒，释放活性化学物质，作用于支气管引起哮喘。传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！实验对象：雄性豚鼠建模方法：1抓取豚鼠，腹腔注射10%卵清蛋白1ml/只致
9、敏（由实验技术室老师在实验进行前15天预先注射）。 2致敏后第15天，雾化吸入1%卵清蛋白（最好是当天配制）60s激发，观察动物呼吸和一般情况，有无咳嗽、呼吸加深加快、烦躁不安等症状。随后继续吸入1030min，直至出现上述症状为止。 3.把动物放入含5g钠石灰的缺氧瓶中，用凡士林涂在瓶塞周围，塞紧瓶塞，连通水银检压计。记录时间和室内温度，每隔3min记录水银面刻度1次，直至动物死亡。记录死亡时间，计算出耗氧率。 4.迅速从缺氧瓶中取出动物，仰卧固定在大鼠手术台上。在颈部正中做切口，用止血钳分离气管周围组织，下面穿线备用。在气管甲状软骨下作倒“T”字型切口，插入连接三通管的气管插管并结扎固定。
10、传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！ 5.用注射器抽取生理盐水4ml，从气管插管的三通管处注入肺部，改变豚鼠体位，尽可能使生理盐水冲洗到每一肺叶。然后回抽，收集支气管肺泡灌洗液。 6.将收集到的BALF放入小试管，2000r/min5min离心。弃去上清，用1ml生理盐水重新溶解沉淀，并轻轻摇晃混匀，进行白细胞和嗜酸性粒细胞计数。 观察指标： 1.观察动物呼吸情况和一般状况，有无呼吸加深加快、咳嗽、呼吸困难和烦躁不安等。 2.BALF中白细胞和嗜酸性粒细胞计数。 3.测定豚鼠耗氧量。四、感染性休克动物模型常见的感染性休克是由革兰氏阴性杆菌感染引起并通过大量产生的内毒素导致休克
11、。本实验通过静脉注射内毒素，导致动物急性感染性休克。实验对象：家兔建模方法：传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！1抓取家兔并称重，3%戊巴比妥钠1ml/kg耳缘静脉麻醉，仰卧固定在家兔手术台上。2剪去颈部被毛，作颈正中切口，分离气管，做气管插管。分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉，穿线备用。3. 剪去下腹部被毛，切开皮肤，沿腹白线打开腹腔。暴露膀胱，分离两侧输尿管，结扎尿道口并进行膀胱插管，连接上记滴器。打开电脑，启动BL-420E生物机能记录系统，选择实验模块：“泌尿实验”中的“影响尿生成的因素”，进行每分钟尿量记滴。 4.从耳缘静脉注入1肝素1ml/kg，进行全身肝素化。 5
12、.在右侧腹直肌旁做纵形切口，钝性分离肌肉，打开腹腔。将一段游离度较大的回肠袢轻轻拉出，平展于事先已注入37生理盐水的观察微循环的恒温灌流盒内，用显微镜观察肠系膜微循环。 6.进行右侧颈总动脉插管，连接BL-420E生物机能系统1通道，记录血压。 7.进行左侧颈外静脉插管，插管约插入56cm。通过三通管连接压力传感器，如果观察到压力数值降为负值且随呼吸上下波动，记录数值，为中心静脉压。三通管另一侧连接静脉输液装置。稳定5min,记录一段正常各项指标。传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！ 8.静脉注射精制内毒素（Ecoli0111B4）1ml/kg或粗制内毒素（灭活的大肠杆菌E）
13、8000亿细菌/kg，观察并记录注射后5min、10min、15min、20min、30min、60min各指标变化。 9.60min后，快速从静脉输入生理盐水20ml/kg，并在生理盐水中加入654-25mg/kg，观察并记录各指标变化。 观察指标： 呼吸频率与幅度、血压、皮肤粘膜颜色和小血管、中心静脉压、尿量、肠系膜微循环（包括：微循环中微血管的流速，口径和每个低倍镜视野下开放的毛细血管数目）。五、肝硬化动物模型 选体重150-200g的Wistar大鼠，将D-氨基半乳糖配制成10的生理盐水溶液，用1NNaOH将pH调节至7.0,以250mg/kg的剂量行腹内注射，每天一次，每周天，约半年
14、左右即可形成肝硬化。在复制过程中，自股动脉取血作肝功能试验，包括血清蛋白测定、浊度试验、转氨酶、乳酸脱氢酶（LDH）、单胺氧化酶(MAO)、-核苷酸酶(5-NA)、-谷氨酰转肽酶(GT)及胆硷酯酶。分批处死动物进行尸解，观察腹水，心、肝、脾、肺肾等器官形态,用4甲醛溶液固定,石蜡包埋,切片厚5微米,进行HE、网状纤维（Gordon与Sweet法)、胶原纤维（VanGieson法)及弹力纤维(Weiger法)染色。传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！在采用上述剂量D-氨基半乳糖长期多次注入大鼠腹腔时，动物耐受性较好。逐渐出现进食活动减少，有时解稀糖大便，腹部较为膨隆。半年内与对
15、照组相比，实验组体重平均增长显著延缓。 尸检时可见腹腔内有腹水，0-20ml不等。心、脾、肺、肾、无明显改变。与对照组相比，早期肝明显增大、重量增加，色泽较灰黄，以后体积逐渐缩小，质地变硬，边缘较钝，肝表面可见弥漫性分布的细颗粒状结节，结节大小不一，直径约为0.5-1.5mm,结节间可见弥漫分布的纤维间隔，间隔一般较细小，其凹凸程度随病变而加深。切片HE染色、光镜下检查，在注射氨基半乳糖5个月后，肝小叶结构开始紊乱,形成大小不等的肝细胞团，有的仍见好的中央静脉，但其周围门脉区胆管上皮高度增生，其间夹有残留的个别肝细胞及少量单核多核白细胞及褐色素沉着。随着病程的延长，增生的胆管及纤维母细胞向四周呈星芒状伸展，有的与中央静脉相连。一般肝细胞变性坏死少见，大多呈增生表现。Gordon与Sweet法染色显示肝细胞团中网状纤维少见而周围组织中存在着大量疏松的网状纤维。胶原纤维及弹性纤维均未见增多。除肝外，其余实质器官切片无异常发现。实验动物在出现肝硬化时血清白蛋白含量稍有降低,浊度试验略增高,血清GPT、LDH
