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1、匀浆:1. 匀浆缓冲液含有多种蛋白酶抑制剂，降低蛋白酶活性，以防蛋白降解。2. SDS在匀浆以后再加入，以防起沫。3. 所有操作尽量在冰上进行。4. 94C水浴（或沸水浴）处理的作用是为了是蛋白变性，以防降解（水浴锅事 先要打开升温）。5. PMSF是有毒试剂，处理时注意。6. 操作过程尽量带上手套，以防人手表面的蛋白和脂肪的污染。7. 热水浴后，离心是用的可以控温的离心机，使用前 15分钟打开使温度降到 4C,即可。8. 离心后分装，可以用枪头先把表面的一层吸走，换取新的枪头在分装。9. SDS,DDT,PMS是用时临时加入缓冲业的，根据母液的浓度计算所需的量。 制胶：10. APS和TEM
2、E是促凝的，根据温度加入的量是可以变动，一般不超过30%。11. 玻璃板一定要洗干净，否则制胶是会有气泡。12. 丙烯酰胺是有毒的，操作时注意安全。（凝胶以后，聚丙烯酰胺毒性降低。）13. 1.5mm的玻璃板有黑色条带封低，1mm勺玻璃板用白色条带封底。（封紧以防 漏胶）14. 凝胶的时间要严格控制好，一般在 20-30min。15. 样品处理时，沸水浴使蛋白充分变性以防在电泳时产热蛋白质降解。一般要5-10分钟。而且要注意把样品的管口封好，以防沸水浴时冲开（出错了）。16. 点样时，如果孔比较多，尽量点在中央。（点在边上时，跑出的带是斜的）17. 点样前要排尽胶底部的气泡，防止干扰电泳。18. 开始电泳时，电压调到80V,当跑过浓缩胶时电压调到100V。19. 电泳结束后，取胶时，小心把玻璃板翘起（防止再次落下）20. 脱色时，尽量多次进行换水。21. 上样量不宜太高，蛋白含量每个孔控制在 10卩g-50卩g,，一般V 15卩I.22. 做胶时，凝胶时间控制在25min。梳子不能歪来歪去。23. 上样时，Mark最好标在中间，边上的孔尽量不要上样。24. 制胶时，在加APS前尽量不要搅拌，加入 APS后可以轻轻搅拌，不要产生气 泡。注意：温度，时间，光照，APS和TEMEDfE会对凝胶产生影响
