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1、龙源期刊网 http:/载体对外源蛋白表达的影响作者：王宝 赵晓会 任莹利 张文钰 郝振华 来源：科技视界2015年第 02期【摘要】本文研究了两种表达载体pET20b ( + )和pET21a ( + )对启动木聚糖酶xynlll表 达的影响。结果表明，在原核表达系统中，xynlll基因在pET20b ( + )载体中的表达效果好于 在pET21a ( + )载体中。【关键词】外源蛋白;表达载体;原核表达木聚糖(Xylan)是植物半维素的主要成份，它是复杂的低分子质量的多糖，由卩-D-木糖 残基通过卩-1, 4键连接成的主链和携带的各种取代基组成1。木聚糖是自然界中主要的可再 生有机资源2，
2、但长期以来得不到充分的重视和利用，造成极大的浪费。现在，借助微生物 代谢已成为降解利用木聚糖的重要工具，木聚糖酶已被应用到造纸工业、食品加工、饲料、生 物转化等行业领域。实现木聚糖酶商业化的必要条件是获得大量表达木聚糖酶的微生物菌株。 重组DNA技术为蛋白质产量的提高提供了技术手段，现已有上百种来自细菌和真菌等微生物 的木聚糖酶基因被克隆出来并成功地在多种原核和真核表达系统中表达。已将卩-1，4-内切木聚糖酶xynlll基因成功地连接到原核表达载体pET20b ( + )(分子量 为3716bp)和pET21a ( + )(分子量为5443bp)上，并转化入大肠杆菌(Escherichia c
3、oli) BL21 (DE3)。为了确定xynlll基因在哪个载体中更能高效表达，本实验对其作了研究比较。1 材料与方法1.1 材料(1) 菌株与载体大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)为实验室保藏菌种。pET20b ( +)和 pET21a( +)为 Novagen 公司产品。(2) 主要试剂胰蛋白胨(Tryptone)，酵母抽提物(Yeast Extract)，琼脂糖 (Agarose)，牛血清蛋白，桦木木聚糖等生化试剂均为TaKaRa产品;氨苄青霉素Amp购自创生公司，DNA分子量Marker (DL2000、九Hindlll)购自TaKaRa公司，蛋白质分子量Marker 购自宝赛公司，氢氧化钠、氯化钠等普通试剂为分析纯。(3) 主要仪器SK18型高速冷冻离心机，Sectrophotometer ND-1000，JY92-II超声波细胞 粉碎机， DYY-5 型稳压稳流电泳仪，衡温振荡培养箱，紫外透射仪紫外分光光度计。1.2 方法1.2.1 质粒的提取
