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共聚焦使用指南

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共聚焦使用指南_第1页
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共聚焦使用指南开机1. 打开显微镜开关,汞灯开关,电脑开关(地上) 2. 打开激光器开关按钮(右边3个,左边1个(观察DAPD)若只分析图 片,只开PC/Stand的开关3. 电脑上打开软件 Leica confocal software公司模式4. 打开激光外器钥匙(右边3个,左边1个(观察DAP))若只分析图片, 不用打开钥匙5. 488激光调节器(LevelAr/ArKr)至水平状态若只分析图片,不用调节 此处显微镜下观察1. 放好样品2. 显微镜身左边:分光拉杆拉至中间,转盘调至相应激发光3. 显微镜身正前方:Poris调至VIS;MAG调至1x4. 选择合适倍数调好焦距:荧光弱需要大倍数 200x,400x采集图片 电脑下观察采集图片(选择第一通道)显微镜转盘转至 显微镜身正前方 电脑软件左下角 点击软件左下角1.2.3.4.5.6.SCAN分光拉杆全部推进Poris调至side;MAG调至B灯亮后回调至UV microcontrol 选择 SCANBeam,选择荧光通道(用途)双击选择Beam右上角DAPI,点击软件左下角 Continous实时观察显示窗口 Experiment的Qlut看曝光是否过度(蓝色表示过度),可调节Beam左上角的ND值,桌上PMT1和pinhole(此值一般 AE在1-1.5, 慎慎 调)控制曝光;ZOPS可调节图片Z轴聚焦。

7. 点击Beam上Save回车2次)8. Continous调至STOF关闭实时观察选择第二通道)9. 双击选择Beam右上角ZZ-FITC点击软件左下角 Continous实时观察10. 显示窗口 Experiment的Qlut看曝光是否过度(蓝色表示过度),可调节Beam上的488通道的百分值,桌上PMT1和pinhole(此值一般AE在1-1.5, 慎调)控制曝光;ZOPS可调节图片Z轴聚焦11. 点击Beam上Save回车2次)12. Continous调至STOP关闭实时观察(选择第三通道)13. 双击选择Beam右上角ZZ-TRITCwide点击软件左下角 Continous实时观 察14. 显示窗口 Experiment的Qlut看曝光是否过度(蓝色表示过度),可调节 Beam上的543通道的百分值,桌上PMT1和pinhole(此值一般AE在1-1.5, 慎调)控制曝光;ZOPS可调节图片Z轴聚焦15. 点击Beam上Save回车2次)16. Continous调至STOP关闭实时观察多通道扫描)17. 点击 Beam 上 sequenee. Remove原有选择18. 找到Beam右上角已保存的三通道,分别 Add添加;sequenee右上角选 择 between frames。

19. 检查软件下方扫描层数LI.A(—般选择4,表示扫描时做4次线平均)20. 点击Series开始扫描显示窗口 Experiment观察)Tiled:单通道观察OVL多通道及合成图像观察局部扫描)在 Continous 实时观察模式下,软件上 Z-in 框选并数码放大局部区域; 软件上 Zoom 可整数倍光学放大局部区域,桌上 Zoom 可非整倍数光学放大 局部区域21. 扫描完毕,点击软件左上角SAVE呆存图片加标尺)22. 找出图片,点击合成后的图片,点击显示窗口 Experiment 的 Single23. 点击软件左边 Setting 的 Seale24. 点击 Send to—Experiment—All(snapshot)四、 关机25.488激光调节器(LevelAr/ArKr)至最小状态26. 关软件,电脑,显微镜开关,汞灯27. 关激光器钥匙(右边 3个,左边 1 个(观察 DAPI))28. 关激光器开关(右边2个:scanner和PC/Stand,左边1个(观察DAP))29. 十分钟后,关激光器开关 1 个: LaserAr/ArKrCa2+离子测定)1. 前面步骤重复至选择好合适通道,Continous实时观察调好参数并保存。

2. 点击modle选择XYT点开软件下方time(有闹钟那个)3. 点击Series开始扫描4. 显示窗口 Experiment中点击Elip圈定细胞5. 点击软件下方 quantity 定量观察。

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