细菌总数监测常见误差分析细菌菌落总数是水源地和地面废水样品检测必做的一项指标菌落总数检测同其他 检验一样，也存在检测误差平板计数法是细菌总数常用方法之一，因此，该值准 确与否直接关系水质好坏微生物平板计数的通常方法为每个样品用3个稀释度，每 个稀释度常做3个重复但如何对平板菌落进行正确计数、3个稀释度以哪一个稀释 度进行计数及微生物检测允许误差等问题，在饲料标准中并未有所规定，而这些问 题与统计值的准确性密切相关我们就实际检测芽抱杆菌工作中遇到一些菌落计数 的问题，与大家进行探讨1材料与方法1.1试验材料1.1.1样品：随机抽取微生态饲料添加剂合生素样品3份1. 1. 2培养基：营养琼脂1. 1. 3仪器设备：磁力搅拌器，无菌培养皿，培养箱，振荡器1. 2试验方法1. 2. 1样品的振荡时间对菌数检测的影响选择1个样品，称取10 g，放人无菌锥形瓶内，加入90 mL无离子水，磁力搅拌 分别为10、20、30、40和60 rain用1 mL移液枪从中吸取1 mL样品悬浊液加入到盛 有9 mL去离子水的试管中，用振荡器使样品充分均匀，以此类推，制成10—〜10—' 不同稀释度的样品溶液平板涂布法检测菌含量：用移液枪从样品稀释液中各吸取 200 L，每个样品稀释液3个重复；将平板倒置于35—37 cC培养箱中培养24 h。
1.2.2 检测方法对菌数检测的影响精心整理各个样品称取10 g,放入无菌锥形瓶内，加入90 mL无离子水，磁力搅拌分别为 40 rain并稀释成10〜〜10不同稀释度的样品溶液倾注平板法检测菌含量：用 移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取1 mL,每个样品稀释液3个重复，待培养 基表面干燥后，将平板倒置于35 37~(2培养箱中培养24 h平板涂布法检测菌含量: 用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取200 L涂布平板，每个样品稀释液3个 重复；将平板倒置于35〜37°C培养箱中培养24 ho 2结果2. 1样品的振荡时间对菌数检测结果的影响采用细菌平板计数的方法，不同振荡时间对合生素中芽抱杆菌检出量的结果见 表1从表1中可见：不同振荡时间获得的细菌菌落数量有较大差别总体而言，在 一定时间内，随着振荡时间的延长检出有效菌含量增加，说明细菌从载体上解析需 要一定的时间；当振荡时间为40 rain后产品中的菌含量基本稳定采用适当振荡时 间才能更精确的显示产品中有效菌的含量表1震荡时间对有效菌含量结果的影响 '["/_. CFU / g震荡时间对有效菌落含量结果的影响震荡时间10分钟20分钟30分钟40分钟60分钟含菌量2610.215143分析与讨论3.1样品处理对结果的影响取样时对样品取样口和取样工具要消毒，防止样品交叉污染。
3.2样品的均质处理对结果的影响固体样品要用均质器或玻璃珠等充分均质，也可在稀释液中添加相应溶解液f如吐温80和液体石蜡等1的稀释液，以保证样品的充分均质测定芽抱杆菌活菌数时，精心整理精心整理 不同振荡时间获得的细菌菌落数量有较大差别，因为细菌从载体上解析并均匀分散 到溶液中需要一定的时间，待测样品应在振荡器上充分振荡，使得芽孢杆菌可以充 分和均匀地分散到待测溶液中，避免因为菌体未完全释放而引起结果中细菌含量偏 低的现象3．3 试验过程中操作方法的影响加样l mL时，用1 mL的吸管并且每做一个稀释度都要换1支吸管，否则稀释度间菌落 计数误差会超过10%，说明存在操作误差用吸管向平皿里加样，平皿开口要小， 吸管要直立且加样结束后，让吸头接触皿底干燥处，保证加样的体积不少若采取 倾注平板法时，平皿加样后要及时倾注琼脂，其间隔一般不超过20 min f最好在10 min 内）以琼脂不烫手（约45°C）为宜，否则会杀灭细菌，太热也会使冷凝水过多，影响 细菌的生长加入琼脂要及时摇匀，先向一个方向旋转，然后向另一方向旋转这 样会减少菌落的集聚和连片现象另外，用力不要过大，使琼脂不溅到IIIL壁和肌 盖上，保证计数结果的准确。
当琼脂凝当琼脂凝固后，要及时移人培养箱倒置培 养若采用涂布平板法进行检测，放置适当时间后，则立即将平皿翻转后放置培养 箱中进行培养，以避免菌落蔓延生长，难以计数为保证结果准确，除作琼脂的空 白对照外，还要对菌落计数的全程做一对照3. 4菌落计数误差菌落计数在完成培养后应立即进行，以防菌落继续生长蔓延从而影响测定结果培 养基中加入TrC f氯化一苯四氮唑）可使细菌菌落显红色，这样可与同样品颗粒和凝 集物（白色）相区分，以提高菌落计数的准确性有学者认为：100 mL培养基中加入2~ 3 mL的TTC可使菌落着色且不抑制细菌的生长菌落计数时要2个人分别用菌落计数 器计数菌落总数，取2个人的平均数报告菌落总数一般来说，每平板含20〜200个 菌落的稀释度的菌含量与实际结果最接近，超过200个/平皿或小于20个/平皿的计精心整理精心整理数结果则可能与实际存在较大差别因此，应尽量选择20〜200个/平皿的稀释度进 行芽孢杆菌的计数，保证菌落计数的有效性报告结果要遵守国标中菌落计数的方 法进行4小结 菌落数检测的误差可能来自于多个方面试验研究表明：除了检测环境和培养基之 外，误差主要来自于样品和检验的操作过程，包括检验的准备环节。
一般认为，微 生物样晶不能复检但当菌落总数在标准的临界或菌落出现明显的异常时，有时重 新检测还是必要的这里所提到的重新检测是对同一批次未开封且保存的时间和温 度都比较合适的样品这样，可以通过重新检测校正误差精心整理。