番茄的植物组培14生物科学一班朱少峰摘要目的：传统西红柿中的番茄红素含量相当少，并且大量存在于西红柿籽周围的类脂物中，所以我们希望通过植物组培的方法获得高产量番茄红素的番茄方法：先对番茄种子进行杀菌消毒，进行培育，再利用培养的幼苗选取外植体进行愈伤组织培养，发育成成熟植株结果：得到了高产量番茄红素的番茄结论：利用组织培养而成的番茄番茄红素的产量较传统种植多关键词：番茄红素愈伤培养激素配比外植体培养、尸■、■前言番茄营养丰富，风味香郁，深受人们的喜爱，在世界各地被广泛种植，成为各国的主要蔬菜作物之一由于它是典型的双子叶植物，具有自花授粉、染色体图谱较清楚、较易栽培等优点，成为生物学领域研究最多的模式植物之一近年来发现番茄中的番茄红素和胡萝卜素具有抗氧化、治疗各种癌症等功能，因此其食用价值和经济价值备受关注一、试验主要仪器和试剂仪器烧杯（100ml3个，用于放初步处理后的外植体；1L1个，用作废液缸；250ml3个，包好牛皮纸后灭菌，分别装酒精、升汞和无菌水）、电子天平、称量纸（若干）、钥匙（若干）、玻璃棒（一根）、量筒（100ml和10ml各1个），胶头滴管（1个）、高压灭菌锅、超净工作台、保鲜膜、酒精灯、记号笔（或标签纸）、培养皿、试管试剂2. 75%酒精、大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、铁盐母液、无菌水、0.1%HgCI2、蔗糖、琼脂、6-BA、NAA实验方法1培养基的选择番茄汁50mL酵母抽提液5g肉膏10g乳糖20g葡萄糖2gk2HPO42g吐温801g乙酸钠5g琼脂15g水加至1000mLpH6.8±0.2MS培养基（1L）大量元素50ml钙盐50ml微量元素10ml维生素10ml铁盐5ml糖50g肌醇0.1g琼脂4.5g注意：1）要在前种物质全部溶解后才能加入后种物质。
2）加热过程中要不停地搅拌3. 当半成品的溶液沸腾时立即从电炉上取下搪瓷杯，放在实验桌上，用玻璃棒沾取少量的液体滴在酸性ph试纸上，用O.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCI调整液体的pH至5.6—5.8，最后在搪瓷杯中用蒸馏水定容至1L培养基的分装4. 准备30支试管，分成两组，一组不添加任何激素，一组添加6-BA、NAA激素番茄种子的处理5. 自来水冲洗种子20min；0.1%氯化汞的浸泡5~10min,依照种皮硬度而定，所以番茄种子我们只消毒5min；然后用无菌水冲洗4次；接种1）将所需物品放入超净工作台：三种实验材料、灭菌好的培养基、无菌水、培养皿、吸水纸、操作工具、空烧杯、75%酒精、0.1%升汞溶液、废液缸、刀片、酒精灯、打火机2）进入接种室前，需要洗净手和手腕进入超净工作台内需用75%酒精纱布擦拭手、手腕，再擦培养基瓶和超净工作台3）剪、镊消毒：接种前剪、镊应插入75%酒精瓶中，取出后置于酒精灯外焰上彻底灼烧，灼烧时应将剪口、镊口张开，烧至剪、镊上火焰熄灭为止，冷却后方可进行接种接种后仍需灼烧并插回75%酒精的磨口瓶待用注意每次取出时剪口并拢，不可接触磨口瓶和其它器皿，并保持尖端向下。
4）种子接种：将处理好的种子无菌操作放进准备好的果酱瓶培养基中，一般放2~3颗5）外植体的处理1. 选取番茄的茎尖再生能力强，其次是遗传稳定性好2. 外植体的初处理将外植体置于医用口缸内，用皂粉清洗干净附着在材料上的泥沙等杂质；并用自来水冲洗干净3. 外植体的消毒灭菌将初处理过的材料在无菌操作台上用75%酒精表面消毒10s，再用无菌水冲洗2—3次；然后再用10%次氯酸钙消毒10—15min（此步骤能有效杀灭真菌），再用无菌水冲洗2—3次；然后再用3%升汞（Hgcl2）消毒10min（此步骤能有效钝化细菌），再用无菌水冲洗2—3次，洗净附着在材料上的药剂4. 将消毒灭菌后的外植体置于灭过菌的滤纸上，吸干水分5. 接种时，用剪刀去除外植体取材时的伤口部位，以尽力保障接种材料不带菌6）注意事项① 操作人员的头、胳膊等不得进入台内② 操作人员不得随意谈话、说笑，以免造成污染③ 用酒精对双手消毒时，务必待酒精彻底挥发后再靠近酒精灯火焰，以免火焰伤台外人员走动要轻、动作要小6培养：培养室的温度应控制在25~28C，每日光照时间为10~12h,光照强度为1600~2000lx此外还要定期观察是否出现污染。
7•实验结果观察和分析在接种后的一周、两周和三周，分别观察各锥形瓶内愈伤组织的形成情况和污染情况，做好记录工作诱导率和污染率，并做相应的实验结果分析诱导率（%）污染率（%）在三次记录工作完成之后对结果进行分析，计算出=形成愈伤组织数/总接种数X100=污染数/总接种数X100实验结果试管中种子成功发芽，但仍有很多种子因污染问题不能发芽8. 讨论1. 本次实验首先第一感觉是很难，因为教学与实验之间相隔一个很大的空白期，所以实验的时候并没有很好的运用理论课的只是，而是盲目的跟随他人的操作，导致污染率其高有些组的外植体完全被污染了，所以实验失败对番茄种子的消毒过程操作不熟练然而，有些添加的激素的试管中，番茄种子成功发芽，也变命了通过完善的激素配比，可以使番茄发芽率进一步提高参考文献雷0柱，胡0荣生物工程下游技术实验手册北京.科学出版社，2010-11薛殿恩．浅谈无公害番茄的栽培技术［J］．农村经济与科技，2011(1):39－43．陆云华，张新，马立新．蕃茄叶片再生系统建立的研究［J］．江西农业学报，2005(4):25－27．刘庆昌，吴国良•植物细胞组织培养［M］.北京：中国农业大学出版社，2003:242－245．潘瑞炽，王小菁，李娘辉.植物生理学［M］.北京：高等教育出版社，2008:175。