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1、医学生物化学实验-教案精品文档 医学生物化学实验教案第1次 课2学时实验项目3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定还原糖实验性质设计性实验教学目的和要求1、了解糖的还原性2、掌握还原糖定量测定的原理和方法。3、熟悉分光光度计的使用方法。教学重点与难点重点:绘制标准曲线的方法，分光光度计的使用原理和使用方法。难点：标准曲线的应用。实验材料1.试剂(1)Im g/m L葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖lO O m g,加少量蒸僧水溶解后，以蒸储水定容至1 0 0 m L,即含葡萄糖为1.0mg/mL。(2)3,5-二硝基水杨酸试剂：称 取6.3 g 3,5-二硝基水杨酸并量取262mL 2
2、mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中(182 g酒石酸钾纳溶于500m L水 中)，再 加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 m L贮于棕色瓶中。(3)未知浓度还原糖。2.材料小麦淀粉或玉米淀粉。3.器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。实验内容一、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5-二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。OH NO 2 OH NH2H O
3、O C S +还 原 糖 -HOOCNO2 NO2(DNS)(3-氨基一5一硝基水 杨 酸)？黄色 桔红色二、实验步骤：1.取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为Img/mL的葡萄糖标准液、蒸僧水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。表1葡萄糖标准曲线制作竹且 lm g/ml葡萄糖 蒸储水 DNS 葡萄糖含 光密度值(OD.标准液(mL)(_)(mL)量(mg)540nm)1 0 0.5 0.5 02 0.1 0.4 0.5 0.1收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档3 0.2 0.3 0.5 0.24 0.3 0.2 0.5 0.35 0.4 0.1 0.5 0.460.5
4、 0 0.5 0.57（未 知 浓 度 还 原、0.5 0 0.5 0.5格）将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5 m in取出，冷却至室温，用蒸储水补足至5 m L,加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。调 波 长540nm,用1号管调零点，分别测出26号管的光密度值。2.绘制标曲以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量(mg)为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线(电脑Excel完成最好)。计算7号管还原糖的百分含量。三、结果与计算:计算出7号管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。查 曲 线 所 得 葡 萄 糖 毫 克 数X提取液总体积/测定时
5、取用体积还 原 糖(%)=X100%样品毫克数教学过程中师生活动设计糖 的 还 原 性，具 有 还 原 性 的 糖 结 构 有 何 特 点？提纲、板书设计实 验 原 理 及 反 应 方 程 式，实 验 步 骤 中 表1及计算公式作业1、为 什 么 要 设 置 空 白 对 照？2、标 准 曲 线 的 定 义？主要参考资料 1 生 物 化 学 实 验 ，何 幼 鸾、汤 文 浩，华 师 出 版 社，2013 2 生 物 化 学 实 验，董 晓 燕 主 编，化 学 工 业 出 版 社，2010总结分析1、让 学 生 理 解 糖 定 量 测 定 的 原 理 及 方 法；2、强 调 标 准 曲 线 的 绘
6、 制 要 点；3、需要和学生一起推导还原糖浓度的公式 医学生物化学实验教案第2次 课2学时收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档实验项目糖的呈色反应和还原糖检验实验性质验证性实验教学目的和要求1.了解糖类某些颜色反应的原理2.学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法教学重点与难点重 点：颜色反应鉴别糖的方法难 点：鉴别糖的反应原理实验材料1、仪器：试管及试管架、滴管、移液管及恒温水浴锅2、试剂：莫氏试剂、塞氏试剂、托伦试剂；1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、1%果糖溶液、1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液实验内容一、实验原理:a 蔡 酚 反 应：糖 在 浓 无 机 盐 作 用 下，脱
7、水 生 成 糠 醛 衍 生 物，后者在浓硫酸 的 作 用 下 能 与a 蔡 酚 生 成 紫 红 色 物 质，在糖液面与浓硫酸液面间出现紫色环。但一些非糖物质对此反应也呈阳性间 苯 二 酚 反 应：在 酸 作 用 下，酮 糖 脱 水 生 成 羟 甲 基 醛，后者可与间苯二酚作 用 生 成 红 色 物 质。此 反 应 是 酮 糖 的 特 异 反 应。醛糖在同样条件下呈色反应慢。托 伦 反 应：戊 糖 在 浓 酸 作 用 下 脱 水 生 成 糠 醛，后者可与间苯三酚结合生成樱 桃 红 色 物 质。本 反 应 常 用 来 鉴 定 戊 糖，戊 糖 此 反 应 最 快，可以和其他糖类区分。二、操作步骤:a
8、蔡酚反应：先 取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%淀粉溶液、1%蔗糖溶液，然后 向3支试管中各加入2滴莫氏试剂，混匀。另外取1支试管，只加2滴莫氏试剂作为空白对照，倾 斜4支试管，沿各试管壁缓慢加入浓硫酸约1.5 m L,慢慢立起试管，切勿摇动。试管中液体分成两层，浓硫酸在试液下面。在两液分界处有紫红色环出现。观察、记录各管颜色。间苯二酚反应：取3支试管，分 别 加 入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液各0.5 mL。再向各管分别加入塞氏试剂2.5 m L,混匀。将3支试管同时置于沸水浴中，注意观察颜色的变化及变化时间。托伦反应：取3支试管，分 别 加 入1%阿拉伯糖溶液、1%半乳
9、糖溶液、1%葡萄糖溶液 各0.1 m L,再向各管分别加入托伦试剂1 m L,混匀。将3支试管同时置于沸水浴中，观察、记录颜色的变化及颜变化的时间。教学过程中师生活动设计观 察 和 记 录 各 管 颜 色 及 颜 色 变 化 的 时 间 后，说 出 各 管 颜 色 变 化 的 原 因。提纲、板书设计原理及操作步骤作业1.简述a 蔡酚反应原理。2.可用何种颜色反应鉴别酮糖存在。收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档主要1 生物化学实验，何幼鸾、汤文浩，华师出版社，2013参考资料2 生物化学实验，董晓燕主编，化学工业出版社，2010总结分析1、让学生掌握糖显色反应的原理；2、给学生强调注意
10、观察各管颜色变化的时间 医学生物化学实验教案第 3 次 课 2 学时收集于网络，如有侵权请联系管理员删除实验项目蛋白质等电点和沉淀反应实验性质基础性实验教学目的和要求1.了解蛋白质的两性解离性质。2.学习测定蛋白质等电点的方法。3.了解蛋白质变性与沉淀的关系及沉淀蛋白质的方法以及其实用意义。教学重点与难点重点：学习测定蛋白质等电点的方法及沉淀蛋白质的方法。难点：蛋白质变性与沉淀的关系，沉淀的蛋白质不一定表现为变性；变性的蛋白质不一定表现为沉淀。实验材料（一）材料新鲜鸡蛋（二）试剂1、0.4%酪蛋白醋酸钠溶液200mL2、1.00mol/L 醋酸溶液 100mL3、0.10mol/L 醋酸溶液
11、300mL4、0.01mol/L 醋酸溶液 50mL5、蛋白质溶液500mL5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清:水=1:9）6、pH4.7 醋酸一醋酸钠的缓冲溶液100mL7、3%硝酸银溶液10mL8、5%三氯乙酸溶液50mL9、95%乙醇 250mL10、饱和硫酸镀溶液250mL11、硫酸镂结晶粉末10000mL12、0.1mol/L 盐酸溶液 300mL13、0.1 mol/L氢氧化钠溶液300mL14、0.05mol/L 碳酸钠溶液 300mL15、甲基红溶液20mL（三）器具水浴锅、温度计、200mL锥形瓶、100mL容量瓶、吸管、试管及试管架实验内容1.实验原理:蛋白质是两
12、性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡：精品文档COO-+七 COO-+H.COOHCOOHPNH2童白质分子阴喜干 鬃性离于 阳离子pHpI pH=pl pH 黄色3.醋酸铅反应（半胱氨酸和胱氨酸）R-SH+2NaOH-R-OH+Na2S+H2ONa2s+Pb2+PbS+2Na+PbS+2HCl PbCb+H2s二、实验步骤:1.双缩股反应（biuret reaction）取1支试管，加乳蛋白溶液（蛋清冰=1:9）约1mL和10%NaOH约2mL,摇匀，再 加l%CuSCU溶 液2滴，随加随摇。观察现象，记录。2.苯环的黄色反应问6个试营中按卜表力口试剂，观祭现象开记求。鸡 蛋 清 溶 液（蚩
13、清:水=1:9）管号123456材料鸡蛋清液指甲头发0.5%苯酚0.3%色氨酸0.3%酪氨酸（滴）4少许少许444浓硝酸（滴）22020444现象逐滴加10%NaOH收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档后现象变化3.醋酸铅反应0.5%醋 酸 铅1mL、10%NaOHlmL、卵 清 蛋 白1mL三 样 试 剂 混 匀 加 热，观察 现 象。然 后 冷 却 至2030,加10滴 浓H C L,再将湿润的醋酸铅试纸放于管 口，加 热，嗅 其 气 味 同 时 观 察 试 纸 颜 色 变 化。教学过程中师生活动设计含 苯 环 的 氨 基 酸 有 哪 些？双 缩 版 反 应 颜 色 与 什 么 相
14、 关？提 纲、板书设计原理及简要操作步骤作业1.在实验室如何区分核酸和蛋白质？2.黄色反应中为何会出现深浅不一的黄色？主要参考资料1 生 物 化 学 实 验 ，何 幼 鸾、汤 文 浩，华 师 出 版 社，20132 生 物 化 学 实 验 教 程 ，王 金 亭，方 俊 主 编，华 中 科 技 大 学 出 版 社，2010总结分析1、实 验 过 程 中 让 学 生 重 点 观 察 颜 色 变 化 的 过 程；2、醋酸铅反应的每一步都要记录现象 医学生物化学实验教案第5次 课2学时实验项目糖的薄层层析实验性质基础性实验教学目的和要求1.了解薄层层析的基本原理。2.熟悉薄层层析的操作过程。教学重点与
15、难/占、重 点：掌 握 薄 层 层 析 的 吸 附 原 理。难 点：掌 握 分 配 系 数，R f值。实验材料四 种 糖 样 品、染 色 液、扩 展 剂、层 析 缸、层析板等实验内容一、实验原理:薄层层析（简 称TLC）是在吸附层析基础上发展起来的一种微量而快速的层析法，它 是 在 吸 附 剂 或 支 持 剂 均 匀 涂 布 的 薄 层 上 进 行 的，故 称 薄 层 层 析。为了使所要 分 析 的 样 品 各 组 分 得 到 分 离，必 须 选 择 合 适 的 吸 附 剂。硅 胶、氧化铝和聚酰胺是 广 泛 采 用 的 吸 附 剂，在 吸 附 剂 或 支 持 剂 中 添 加 合 适 的 粘 合
16、 剂 后 再 涂 布，可使薄层 紧 贴 在 玻 璃 板 上。糖 是 多 羟 基 化 合 物 在 硅 胶G薄 层 上 展 层 时，被 吸 附 的 强 弱 有 差 异，同时在展 开 剂 中 溶 解 性 质 也 有 差 异。吸 附 力 主 要 与 糖 的 相 对 分 子 质 量 和 羟 基 数 有 关，一般 为 三 糖 二 糖 单 糖，醛 糖 酮 糖 脱 氧 糖。经 过 适 当 的 溶 剂 展 开 后，糖在薄收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档板上的移动速度是戊糖己糖双糖三糖。薄层层析与其他方法比有明显的优点：层析时间短、样品用量范围大(1圈-0.5g)、观察结果方便、可以分离多种化合物等，其灵敏度比纸层析高10-100倍，显色方法甚至可以用腐蚀性显色剂。而且薄层层析法操作方便，设备简单，所以薄层层析法目前应用范围相当广泛。二、实验步骤:1.点样选取制备好的薄板一块，在距底边1.5cm的直线上均匀选4 个点。用毛细管分别点上不同的糖样品于4 个点，样品量控制在5-10隔，斑点直径不超过3mm。点样完毕，立即用电热吹风机吹干样点。2.展层将薄板置于盛有层析溶剂的层折缸中，自下向上展层，
