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1、精品资料MDA含量的测定SOP.MDA含量的测定SOP主要目的:为了测定样品中的MDA含量,作为机体内脂质过氧化的程度的一个指标。主要原理:测定原理为过氧化脂质降解产物中的丙二醛可与硫代巴比妥酸(TBA)缩合,形成红色产物,在532 nm 波长下有最大吸收峰100。用酶标仪在532 nm处测定吸光度(OD值),计算样品浓度。因底物为硫代巴比妥酸,所以此法称为TBA法。实验室签章一、 试剂无水乙醇(分析纯)硫代巴比妥酸冰醋酸双蒸水丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物研究所)二、 仪器设备96孔酶标板UV-Vis可见多功能酶标仪旋涡混匀器水浴锅移液枪及相应量程枪头三、 实验方法根据试剂盒说明书
2、具体操作步骤如下:1. 向标准管0.1 mL标准品,空白管加入0.1 mL无水乙醇,测试管和对照管加入稀释后的血清或组织上清液0.1 mL,然后各管中再分别加入0.1 mL试剂一,摇动几下试管架晃匀,向各管中分别加入3 mL的试剂二和1ml的试剂三,同时只向对照管中加入50%冰醋酸1 mL。2. 旋涡混匀器混匀,试管口用保险薄膜扎紧,用针头刺一小孔,95水浴40分钟,取出后流水冷却,然后4000转/分,1cm光径,双蒸水调零,测定各管吸光度值。3. 血清中MDA含量计算公式MDA 含量(nmol/mL)标品浓度样本前稀释倍数组织中MDA含量计算公式MDA 含量(nmol/mgprot)标品浓度样品蛋白浓度(mgprot/mL)Lu T C, Ko Y Z, Huang H W, et al. Analgesic and anti-inflammatory activities of aqueous extract from Glycine tomentella root in miceJ. Journal of ethnopharmacology, 2007, 113(1): 142-148.