这个基因区段的进化速度高于16S rDNA，因此可以发展成 为细菌种甚至株的鉴定方法除此以外，还有其它一些高度保守的序列，如 gyrB基因(细菌中广泛存在的一种编码DNA的拓扑异构酶II的B亚基的单拷贝 基因)、toxR基因(弧菌中的毒素表达调控蛋白基因)等也越来越广泛的被用于 对病原性细菌进行分子生物学鉴定2.2多重PCR技术多重PCR技术是在常规PCR基础上改进并发展起来的一种新型PCR扩增技 术，其检测原理与传统PCR相同•如果存在与各引物对特异性互补的模板，只 不过是在同一反应体系中加入1对以上的特异性引物，那么就可以同时在同一 个反应管中扩增出l条以上的目的DNA片段使用这一方法可以同时检测1 个以上目的基因或者借助其交叉限制进行确认可同时检测多种病原微生物 该技术自1988年Chamberlain首次应用于杜氏营养不良症(Duchenne musculardystrophy)基因外显子缺失的检测以来，已经在遗传病诊断、转基因 鉴定、病原体检测等各个领域成功的得到应用[2]2.3 免疫一 PCR免疫PCR是Sano等在1992年首创，其关键在于用一个连接分子将一段特 和 DNA 分子之间建立相对应关系，将对蛋白质的检测转化为对核酸的检测，从 而可以运用PCR的高度敏感性来放大抗原抗体反应的特异性，由PCR反应产物 的量反映抗原分子的量。
[3]2.4 反转录 PCR反转录PCR是指在PCR扩增之前，先用DNA酶破坏样品中的DNA，再在混 合液中加入逆转录酶和随机引物 （常为六个碱基） ，即可将样品中的 mRNA 和 rRNA逆转录成cDNA，然后再扩增特定的目的基因序列.2.5 实时荧光 PCR实时荧光PCR技术将PCR和核酸杂交以及荧光信号放大结合同步进行；与 常规PCR相比，该技术不仅实现了 PCR从定性到定量的飞跃，而且由于结合了 PCR 技术的高灵敏度和核酸杂交技术的特异性，它具有特异性更强、有效解决 PCR 污染问题等特点，目前已在国内外广泛用于基因表达研究、转基因研究， 药物疗效考核、病原体检测等诸多领域实时荧光PCR技术实现了荧光信号的 累积与PCR产物形成完全同步，在扩增的同时进行检测，不需要PCR后处理， 不仅避免了交叉污染机会，而且大大节约了检测所需的时间3. PCR技术检测食品微生物的优点3.1 方便性操作烦琐，自动化程度不高是传统检测方法的一大缺点传统的检测方法 往往需要花费大量的人工来实现适合不同微生物生长的培养基以及不同微生 物适宜生长的pH、温度等都需要花费一定的人力和时间，观察菌落特征、细 胞特征、革兰氏染色以及生理生化鉴定等步骤烦琐。
因此，落后的检测方法与 高自动化的现代企业形成鲜明的对比，极大地限制了现代化食品企业的发展 而 PCR 技术检测食品微生物操作简单、方便，仅用一人就能完成检测，具有极 大的方便性3.2 快捷性传统的检测方法最大的缺点就是检测需要时间长，一般的腐败菌检测至少 需要2到5天，甚至7天以上检验结果出来时往往产品已经流向市场，对实 际生产具有严重的滞后性而PCR技术检测食品微生物能在一天之内检测出结果．甚至在几个小时就检测出结果，对食品工业生产具有很好的指导作用3.3 准确性食品中污染微生物种类很多，即使是同一种食品中微生物种类也有很多， 用传统的方法检测食品中微生物要分离出所有的微生物很困难特别是在检测 食品中的弱势菌时．可能很难用传统的方法检测出来，特别是有些微生物很难 培养，而用PCR技术检测这些微生物可以避免这些问题因此.利用PCR技术 能够比较准确地检测食品中微生物[4]4. PCR检测食品微生物的主要流程4.1 引物设计引物的优劣直接关系到PCR扩增的特异性与成功与否，PCR引物对扩增的 逐渐明了，使得引物设计变得更为容易设计的准确性则取决于对所检测对象 的遗传背景的了解4.2 模板的制备PCR 检测方法的可靠性一部分依赖于目标模板的纯度与充足的目标分子 数量，绝大部分PCR检测依旧要求富集步骤。
食品中有相当多PCR抑制因子， 要尽可能地除去（包括DNA提取时蛋白与有机溶剂等的去除），这一步的好坏直 接影响最终检测结果不管是在提取微生物的核酸，亦或是直接处理食品样品， 模板的制备都很重要，尤其是直接处理样品时.5. PCR 技术在食品致病菌检测中的应用传统方法检测食品中致病菌的步骤繁琐费时，需经富集培养、分离培养、形 态特征观察、牛理生化反应、血清学鉴定以及必要的动物试验等过程，并且传统 方法无法对那些难以人工培养的微生物进行检测而应用PCR技术，只需数小时, 就可以电泳法检测出0.1 mgDNA中仅含数个拷贝的模板序列；用PCR扩增细菌中 保守的rDNA片，还可对那些人工无法培养的微生物进行检测利用PCR检测食 品中的致病菌，首先要富集细菌细胞，通常经离心沉淀、滤膜过滤等方法可从样 品中获得细菌细胞，然后裂解细胞，使细胞中的DNA释放，纯化后经PCR扩增细 胞靶DNA的特异性序列，最后用电泳法或特异性核酸探针检测扩增的DNA序列5.1检测沙门氏菌近年来，用 PCR 技术检测沙门氏菌得到了迅速发展，产生了许多种 PCR 法如常规PCR、套式PCR、多重PCR也可几种方法结合使用，将常规PCR 与半套式PCR相结合，根据沙门氏菌中保守的16SrRNA基因为模板设计了一对 引物，扩增的片段为555bp。
经过优化设计反应条件，只对沙门氏菌产生特异 扩增，敏感性达30cfu为了对扩增结果进行鉴定，又在这两条引物之间设计 一条半套式引物经半套式 PCR 检测证明第一次产物是正确的，且灵敏度提 高至3cfu此外，还可将PCR与微孔板检测、与ELISA技术、与探针杂交有 机结合起来5.2检测单核细胞增生李斯特菌李氏溶血素 O 基因与内化素基因是单核细胞增生李斯特菌最主要的致病 因子与侵袭因子，这两个致病基因的位点均在染色体上溶血素由hlyA基因 编码，且hlyA基因在该菌中保守根据发表的单核细胞增生性李斯特菌的重 要毒力基因hlyA的全基因序列，设计出引物，建立了该菌的PCR诊断方法， 结果显示扩增可获得预期743bp的片段，且扩增具有极好的种特异性同时， 实验结果表明，用食品标本检测时，许多复杂成分含抑制Tag酶的活性，当经 过增菌培养，并对培养物进行化学抽提，去除样品中的脂类和蛋白质，纯化的 菌体经加热裂解后直接用作PCR反应模板，可大大提高检出率5.3检测金黄色葡萄球菌随着基因探针和PCR技术的应用和发展，使金黄色葡萄球菌肠毒素的诊断 检测发生了一次飞跃目前主要是利用聚合酶链反应技术(PCR),对金黄色葡 萄球菌肠毒素中的较常见的、耐热的B基因(SEB)进行检测。
由于快速诊断往 往不宜用纯培养物而是用原始样品，因此易混人大量杂菌，为了确定此方法的 特异性，采用大肠杆菌作为干扰菌进行PCR检测，实验证实了杂菌在比靶细菌 高出万倍的情况下，也不影响细菌的检测，因而本实验采取的PCR方法检测食 品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因，既快速(24 h即可报告结果)、准确、特 异性强，同时可以提高检出率，节省检测时间，又可节省人力和物力[5]6. 水产养殖动物细菌性病原检测随着我国水产养殖规模的不断扩大和集约化水平的提高，各种水产养殖动物 病害的发生日益频繁，危害也越来越严重，己成为制约整个水产养殖业发展的最 重要的因素之一近年来，寻求水产动物病害的有效防治方法越来越受到国内外 学者的广泛关注，其中水产养殖动物病原的快速、准确检测是对水产动物病害进 行有效防治的基础和先决条件随着分子生物学的迅速发展，PCR技术在水。