《蛋白定量分析实验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蛋白定量分析实验（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、蛋白定量分析实验丨实验一 双缩脲法测定蛋白质含量实验原理：蛋白质分子中含有许多肽键，与双缩脲结构类似，在碱性溶液中能与铜离子结合 成紫色的化合物（称双缩脲反应）。在一定浓度范围内，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比， 故可用比色法测定蛋白质的含量。含有两个以上肽键的物质才有此反应，故氨基酸无此反应。 实验结果：试剂（ml）1234567标准蛋白质溶液（ml）0.10.30.50.70.9样品0.1蛋白质克数（mg）135798.230生理盐水（ml）0.90.70.50.30.11.00.9双缩脲试剂（ml）4.04.04.04.04.04.04.0吸光度0.0790.2340.3600.5050.
2、66500.602实验二 考马斯亮蓝测定蛋白质含量实验原理：考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色，红色和蓝色。它和蛋白质通过范德华 力结合，染料与蛋白质结合后颜色由红色转变成蓝色，最大吸收峰从 465nm 变成 595nm， 通过测定595nm处的光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。应用考马斯亮蓝法的优点 是：1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高4倍，其最低蛋白质检测量可达1p g。2）测定 速度快、简便，只需一种试剂。 3）干扰物至少。实验结果：试剂（ml）空白管标准管样品管生理盐水0.1标准蛋白溶液0.1样品0.1考马斯亮蓝试剂5.05.05.0吸光度00.3930.203OD 样
3、品/0D 标准 X50=样品中蛋白质的量|J g/ml=0.203/0.393x500=0.26mg/ml实验三 紫外分光光度法测定蛋白质含量实验原理:蛋白质分子中含有的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质，吸收高峰在280nm波长处。由于各种蛋白质所含芳香族氨基酸的量 相差很少，因此在此波长范围内吸收峰的吸光度值与其浓度成正比，可做定量测定。由于各 种蛋白质中芳香族氨基酸含量的不同，因而此法适于测定与所采用的标准蛋白质的氨基酸组 成相似的蛋白质，以减少误差。一般核酸在280nm波长处也有吸收，对蛋白质测定有干扰作用，但核酸的吸收高峰在260nm, 因此溶液中同时存在核酸时，必须同时测定A260和A280,通过计算消除核酸对蛋白质的影 响而算出蛋白质的含量。实验结果试剂(ml)1234567标准蛋白质溶液(ml)0.511.522.51蛋白质浓度(mg/ml)0.1250.250.3750.50.6250.204生理盐水3.532.521.543吸光度0.1940.440.6120.790.98100.340误差分析：
