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1、高效液相色谱仪使用说明1.型号： LC-10AT产地日本岛津 。2.用途：高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合，HPL C 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。由于HPL C 具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析
2、、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。3. 测定原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统， 样品溶液经进样器进入流动相 ,被流动相载入色谱柱(固定相 ) 内 , 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时 , 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。4.使用方法4.1系统组成：本系统由1个 LC-10ATvp溶剂
3、输送泵、 Rheodyne7725i 手动进样阀、SPD-10Avp 紫外 -可见检测器、色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。4.2准备4.2.1准备所需的流动相，用合适的0.45 m滤膜过滤，超声波脱气 20min 。4.2.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。4.2.3配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的 0.45 m滤膜过滤。3.2.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常，特别注意输液管道内是否有气泡。4.3开机：接通电源，依次开启不间断电源、溶剂输送泵、先将机器预热半小时，这时的流动相用 85甲醇溶液
4、（已脱气） ，而且要时刻注意输液管道内是否有气泡，如有气泡要进行排气。预热半小时后，开启检测器，待检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。4.4各种参数设定4.4.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按func 键，用数字键输入所需波长值，按Enter 键确认。按 CE 键退出到初始屏幕。4.4.2流速设定：在输送泵显示初始屏幕时，按func 键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过 1ml/min ），按 Enter 键确认。按 CE 键退出。4.5更换流动相并排气泡4.5.1将输送管道的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶（已排气）中；4.5.2逆时针
5、转动泵的排液阀180 度，打开排液阀；4.5.3按泵的 purge 键， pump 指示灯亮，泵大约以2ml/min 的流速冲洗， 3min （可设定）后自动停止；将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为 5ml/min ，按 pump 键，冲洗 3min 后再按 pump 键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。4.6平衡系统4.6.1按大连江申色谱数据工作站操作规程打开“在线色谱工作站 ”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集 ”页的 查看基线 按钮。4.6.2等
6、度洗脱方式按输送泵的 pump 键，泵启动， pump 指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需 6 倍柱体积的流动相。4.6.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。4.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa 。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按 3.5 操作。4.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min ，噪声为 。如为单向阀和阀座之间夹有异物, 拆下单向阀 , 放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗 .5.5 出峰不佳 ,峰分叉。原因 (1) 色谱柱被污染; (2) 柱头填料塌陷。处理对于第一种情况, 先用纯水反向冲洗柱
7、子, 然后换成甲醇冲洗, 接着用甲醇 + 异丙醇 (4 + 6)冲洗柱子 (冲洗时间的长短由样品污染的情况而定) , 再换成甲醇冲洗, 然后用纯水冲洗 ,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30 分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头 ,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料 ) ,装入新填料 , 滴一滴甲醇 , 填料下陷 , 再填 , 用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平 , 滴甲醇 , 再压紧反复几次 , 直至装满填平 2 。柱头用甲醇冲洗干净 , 擦净柱外壁的填料 , 拧紧柱头 ,用纯甲醇冲洗 30 分钟以上。5.6 峰面积重复性不佳。原因 (1) 进样阀漏液 ; (2) 加样针不到位。处理对于第一种情况更换进样阀垫圈; 对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJ EC T 状态 ,以保证进样量的准确。日常工作中 , 液相色谱仪的保养非常重要, 如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中, 储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液, 每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净 ,防止无机盐析出或沉积; 样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质完全溶解 , 尽量减少对色谱柱的污染,
