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1、一种简便的丹参丹酚酸提取工艺水塔（北京）老陈醋生物科学有限公司车建途冯小珺于雷张丕馥陶中才摘要：丹参中药材取自唇形科植物丹参的根，在中医临床上，丹参主要用来治疗冠心病、脑血栓、肝炎及肝硬化等。该药长期的临床应用背景及在治疗疾病方面的明显效果，引起了国内外学者对其水溶性酚类化合物的重视。丹酚酸B是丹参水溶性成分中最主要的活性物质，其含量较高，占丹参药材的2%-8%。丹酚酸B的活性很强，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用，还具有抗血小板聚集并对血栓形成的作用。因此，丹酚酸B的提取技术的研究受到了医药界的关注。本实验简化了丹参中丹酚酸B的提取方法，以简单低成本的提取方法得到丹酚酸B纯度较高
2、的干粉。1. 实验原料和仪器主要原料：丹参饮片。本次实验使用的丹参为：四川中江丹参（成都药材批发市场）陕西秦岭野生丹参（网上药店）其它材料或试剂：去离子水，乙醇，10%盐酸，乙酸乙酯实验仪器：电炉，水浴锅，冷凝管，真空泵，低温高速离心机，旋转蒸发仪，冷冻干燥器，以及烧杯等常用玻璃仪器。基本提取工艺流程图提取工艺具体操作步骤1.取丹参饮片，加10-12倍量的30%-40%的乙醇溶液，浸泡1-2小时，煮沸回流提取1.5-2小时，过滤，滤渣加8-10倍量的相同浓度乙醇溶液，煮沸回流提取1.5-2小时，过滤，将两次提取液合并。2. 将上述提取液55C以下浓缩至1-1.5倍量，用10%的盐酸酸化至pH为
3、2.5-3，抽滤或离心去掉悬浮颗粒不溶物。3. 滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，50C以下减压浓缩回收乙酸乙酯。4. 将浓缩后的浸膏（干粉）溶于1.5倍量去离子水中，继续浓缩至干，重复两次，即可去除产品中残留乙酸乙酯。浓缩液取出经真空冷冻干燥，既得丹酚酸总提物。提取物质量控制指标检测项目质量标准物理性质性状乳黄色粉末气味特有的中药材味粒径100%通过80目化学性质重金属WlOppm砷（As）W2ppm农药残留W2ppm乙酸乙酯残留W5g/g乙醇残留W5Pg/g微生物细菌总数W1000cfu/g霉菌及酵母W100cfu/g大肠杆菌不得检出沙门氏菌不得检出功效成分总丹酚酸（以丹酚酸B计）
4、三65%丹酚酸B三55%迷迭香酸丹参素钠其它贮存条件密封，置阴凉干燥处有效期提取出浸粉率1. 提取物功效成分检测方法HPLC法测定丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参素钠色谱条件色谱柱：AgilentZorbaxC18;流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59)；流速：1.0ml/mL；检测波长：286nm；进样量：20/1对照品溶液制备精密称取丹酚酸B对照品，用水溶解，并稀释成浓度为0.20mg/mL的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液制备精密称取适量固形物，加适量水溶解，用水稀释样本溶液浓度为0.4mg/mL，则作为供试品溶液。计算方法以峰面积，外标法计算含量。实验过程及结论一、检测
5、酸化对提取物中丹酚酸B含量的影响取陕西丹参200g，加入2400mL40%的乙醇溶液按照方案二的方法提取。浓缩后平均分四份，分别酸化至2、2.5、3、3.5。将四组置于相同条件下萃取，并冷冻干燥，检测所得物。以下为检测结果：丹参品种陕西丹参酸化后pH2.02.53.03.5干燥固形物中质量1.73g1.64g1.53g1.13g干粉得率3.47%3.28%3.05%2.26%干燥固形物中丹酚酸A含量8.01%7.67%4.36%9.73%干燥固形物中丹酚酸B含量75.92%83.51%86.86%87.34%干燥固形物中迷迭香酸含量3.99%3.07%3.22%4.26%干燥固形物中丹参素钠含
6、量4.33%3.96%3.69%2.33%丹酚酸B得率2.63%2.74%2.65%1.97%第一次测试结果明显表明随着pH从2-3.5的增长，丹酚酸提取物中丹酚酸B的含量也在上升。且pH为2.5、3、3.5时丹酚酸B纯度相差很小；而干粉质量（得率）却在直线下降。以下为第二次检测结果（实验方法相同，丹参质量为300g，添加了pH=4以及不进行酸化的对照组，其余条件均与第一次一致）丹参品种陕西丹参酸化后pH2.02.53.03.54.0未酸化干燥固形物中质量1.33g1.49g1.58g1.31g0.628g0.359g干粉得率2.71%3.05%3.22%2.69%1.28%0.73%干燥固形
7、物中丹酚酸A含量6.40%6.42%6.21%5.93%4.29%4.91%干燥固形物中丹酚酸B含量73.20%89.94%91.48%88.69%38.58%66.47%干燥固形物中迷迭香酸含量3.70%3.65%3.45%4.12%8.13%6.03%干燥固形物中丹参素钠含量4.97%3.47%3.33%2.56%3.06%2.65%丹酚酸B得率1.987%2.74%2.95%2.38%0.49%0.49%第二次测试结果与第一次测试结果反应一致，而pH为4以及未经酸化（pH值大约为4.4-4.6）时提取物很难溶于水，用传统冷冻干燥方法难以检测，故不采用。经测试，丹参在pH为2.5-3.5条
8、件下提取纯度较高，而由于pH=3.5的时候有较少不溶于水的杂质，且提取干粉质量较低，故选取酸化pH为2.5至3。二、检测去除乙酸乙酯残留过程对丹参提取物中有效成分含量的影响实验步骤：取四川丹参300g,做丹参丹酚酸提取。乙酸乙酯萃取后,浓缩回收部分乙酸乙酯，剩余的有机溶液平均分为三组，标记A、B、C。分别浓缩至干，在相同环境下做去除乙酸乙酯残留实验。A组为对照组，B组C组分别加超纯水溶解，在55C下减压蒸馏4次、8次，每次加水10mL并减压蒸馏一小时，检测其冻干产物中有效成分含量。以下为测试结果：分组样品描述样品质量丹酚酸A丹酚酸B迷迭香酸丹参素钠A未减压蒸馏3.351g4.17%76.02%
9、4.1%4.6%B减压蒸馏4h3.161g3.97%86.23%4.23%5.18%C减压蒸馏8h3.127g4.35%82.92%4.04%4.96%重复实验得出结论：B和C组比较可得，经过多次减压蒸馏，丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参素钠的含量会随减压蒸馏次数和时间的增多而有所减少，但减少量并不显著，可忽略不计。B组由于去掉大量乙酸乙酯，有效成分的纯度与A组比有较大提高。实施例实施例1取陕西丹参90g,加12倍量的40%乙醇，浸泡2小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，53C减压浓缩至150mL,将浓缩液酸化至pH=3,抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48
10、C减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，得到得到丹酚酸总提物3.04g，其中丹酚酸B的含量为81.1%，丹酚酸得率为2.74%。实施例2取陕西丹参100g，加12倍量的40%乙醇，浸泡1.5小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，52C减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH=3,抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48C减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，即得到得到丹酚酸总提物3.32g，其中丹酚酸B的含量为81%，丹酚酸得率为2.69%。实施例3取四川丹参100g，加12倍量的40%乙醇，浸泡1.5小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，52C减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH=3,抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48C减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，得到得到丹酚酸总提物2.51g,其中丹酚酸B的含量为83.4%,丹酚酸得率为2.1%。经多次实验，该工艺结果稳定，实验过程和设备简单，条件温和，实验成本低，得到丹酚酸B纯度高，在实验室条件下效果较好。
