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1、细菌培养实验流程一. 配置培养基二. 培养基灭菌三. 倒平板四. 采样五. 细菌培养六. 计数，结果计算一 配置培养基1.称量：按配置300ml培养基的量称取平板计数琼脂（PCA） 7.05g，倒入烧杯中。2溶化：在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后在石棉网上加热时药品溶解。待其完全溶解后，补充水到所需要的总体积300m 1。加热过程中需要不停搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂3分装：将配置的培养基分装入三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 4加塞：培养基分装完毕后，在三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好 的
2、通气性能。5包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸或旧报纸，以防止灭菌时冷凌水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。 用记号笔注明培养基名称，组别，配置日期。二.培养基灭菌1装锅：先向外层锅内加入适量的水，（液面达到支撑三角架高度）并装入待灭菌物品。2加盖：将盖上的排气软管插入内层的灭菌桶的排气槽内，以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，勿使漏气。3灭菌：加热，并同时打开排气阀，待冷空气完全排尽后，关上排气阀，升温至121C, 103kPa时维持20min。4降温取物：灭菌结束后，切断电源，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，开盖取物。三倒平板1. 将无菌平皿，灭菌后的三角烧瓶，酒精灯，记号笔放入无菌
3、柜中，开臭氧消毒10min2臭氧消毒结束后等待10min开始倒平板，点燃酒精灯放置于瓶口的下方，倒入溶化后冷却至45C的琼脂培养基约 1015m 1,置水平位置，迅速旋动均匀，待凝固后，倒置备用。并从1开始顺序编号。四採样1规则：每次采样使用610个平皿，第1个平皿作为空白试验，消毒前采样取两个点使用24个平皿，消毒后采样 取35个点使用35个平皿。2. 采样高度：与地面垂直高度80150cm。3布点方法：室内面积30 ，设一条对角线上取3点，即中心一点，两端各距墙1m处各取一点；室内面积30 ， 设东，西，南，北，中5点，其中东，西，南，北点距墙lm。4采样方法：用浮游微生物采样器在采样点抽空气500L （5min）后送检培养。 或者用9cm直径营养琼脂平板在采样点暴露510min后送检培养。5采样时间：消毒机工作前安排人员模拟现场环境活动，谈话10min，然后取两个点采样后送检培养。消毒剂开启 光催化消毒13小时后，取35个点采样后送检培养。五. 细菌培养将有编号的培养皿放入37C恒温培养箱中培养24h48h六. 计数，结果计算1取出培养平皿，算出几个所测平板上的菌落平均数N。2.结果计算空气细菌菌落总数（cfu/mj =50000N/AT 式中：A-平板面积，C m2；T平均暴露时间，minN-平均菌落数，cfu/平皿。
