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1、0内酰胺酶及其活力测定法培养基胨15g甘油50g氯化钠4g 0.1 %硫酸亚铁(FeSO47H2O)溶液0.5ml枸橼酸钠 5.88g 20%硫酸镁(MgSO47H2O)溶液1ml磷酸氢二钾4g 肉浸液1000ml混合上述成分，调节pH值使灭菌后为7.07.2，分装于500ml锥形瓶内，每瓶80ml,在115C灭菌30 分钟。酶溶液的制备取蜡样芽抱杆菌Bacillus cereus CMCC(B)63301 的斜面培养物，接种至上述一瓶培养基内，在25C摇 床培养18小时后，取此培养物接种至其余各瓶培养基内，每瓶接种10ml,同时每瓶加入无菌青霉素4500 单位，在25C摇床培养24小时，再加
2、无菌青霉素2万单位，继续培养24小时，再加无菌青霉素2万单位, 继续培养24小时，离心沉淀菌体，调pH值至约8.5，用滤柱滤过除菌，滤液用无菌操作调pH值至近中性后， 分装于适宜容器内，在10C以下贮存，备用。酶活力测定法青霉素溶液称取青霉素钠(钾)适量，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)溶解成每1ml中含青霉素1万单位的溶液。青霉素酶稀释液取青霉素酶溶液，按估计单位用磷酸盐缓冲液(pH7.0)稀释成每1ml中约含青霉素酶800012 000单 位的溶液，在37C预热。测定法精密量取青霉素溶液50ml,置100ml量瓶中，预热至37C后，精密加入已预热的青霉素酶稀释液25ml， 迅速混匀，在37C准
3、确放置1小时，精密量取3ml，立即加至已精密量取的碘滴定液(0.01mol/L)精密量 取碘滴定液(0.1mol/L)10ml，置100ml量瓶中，用醋酸钠缓冲液(pH4.5)稀释至刻度25ml中,在室温暗处放 置15分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失。空白试验取已预热的青霉素溶液2ml，在37C放置1小时，精密加入上述碘滴定液(0.01mol/L)25ml，然后精密 加青霉素酶稀释液1ml，在室温暗处放置15分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定。按下式计算：E = (B-A)xMxFxDx 100式中E为青霉素酶活力，(单位/ml)/小时；B 为空白滴定所消耗的上述硫代硫酸钠滴定液的容量， ml；A 为样品滴定所消耗的上述硫代硫酸钠滴定液的容量， ml；M 为硫代硫酸钠滴定液的浓度， mol/L；F为在相同条件下，每1ml的上述碘滴定液(0.01mol/L)相当于青霉素的单位数；D 为青霉素酶溶液的稀释倍数。附注磷酸盐缓冲液(pH7.0)取磷酸氢二钾7.36g与磷酸二氢钾3.14g，加水使成1000ml。醋酸钠缓冲液(pH4.5)取冰醋酸13.86ml,加水使成250ml;另取结晶醋酸钠27.30g，加水使成200ml，两液混合均匀
