琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制［原理］ 肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶，能催化琥珀酸脱氢转变成延胡索酸反应中生成的FADH2 可使蓝色的甲烯蓝还原为无色的甲烯白（还原型甲烯蓝）丙二酸与琥珀酸的分子结构 相似，是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂，故能与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶的活性中心丙二 酸与琥珀酸脱氢酶结合后，酶活性受到抑制， 则不能再催化琥珀酸的脱氢反应抑制程度 的大小，随抑制剂与底物两者浓度的比例而定本实验以甲烯蓝为受氢体，在隔绝空气的条件下，通过甲烯蓝的褪色程度来判断琥珀 酸脱氢酶的活性，并籍此观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用fH2COOH&HCOOHHOOCCH延胡索酸ch2 COOH 琥珀酸［试剂］1．0.2mol/L琥珀酸：取琥珀酸钠（MW:270.14）27克加水至500ml2．0.02mol/L琥珀酸：取1液稀释10倍3. 0.2mol/L 丙二酸：取丙二酸钠（MW:166.05）16.7 克加水至 500ml4. 0.02mol/L丙二酸：取3液稀释10倍5.1/15mol/L pH7.4磷酸盐缓冲：l/ISmol/LN^HPOq溶液 80.8ml 与"15mol/LKH2PO419.2ml混合即成。
1) 1/15mol/LNa2HPO4溶液：取 Na2HPO4.12H2O (MW： 358.14)23.876 克,加水至1000ml2） 1/15mol/LKH2PO4溶液:取 KH2PO4（MW： 136.09）1.814 克,加水至 200ml.6. 0.02％甲烯蓝溶液7. 液体石蜡［主要器材］1. 新鲜猪心2. 玻璃研钵3. 漏斗4．手术剪5．棉花6．恒温水浴箱［操作步骤］1. 心肌提取液的制备取新鲜猪心约6g,用蒸馏水清洗后剪成碎块，置于研钵中， 加入适量净沙，研磨成糜状再加1/15mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液12ml，研成糊状，用棉花 过滤，滤液即为猪心提取液2. 取小试管5支，编号，按表11操作：表11试剂（滴）1管2管3管4管5管猪心提取液20202020——0.2mol/L 琥珀酸444——40.02mol/L 琥珀酸——————4——0.2mol/L 丙二酸——4——4——0.02mol/L 丙二酸————4————蒸馏水4——————240.02%甲烯蓝111113. 将上述各管摇匀,于各管滴加液体石蜡5滴以隔绝空气，置于37°C水浴中保温，随时观察各管甲烯蓝褪色情况，记录时间，确定5 个试管的褪色顺序并解释结果。
［注意事项］1. 加液体石蜡时宜斜执试管，沿管壁缓缓加入，不要产生气泡2. 加完液体石蜡后，在观察结果的过程中，不要振摇试管, 以防止溶液与空气接触而使 甲烯蓝重新氧化变蓝。