家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测

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1、家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测姓名温正煌学号201212200904011专业临床医学班级本部4班1. 实验目的用氯化汞中毒方法复制家兔急性肾功能不全模型。2. 观察急性肾功能不全时肾功能评价指标变化,从而探讨致病因素及急性肾功能不全的可能发病机制。实验材料和方法实验仪器:分光光度计,离心机,恒温水浴锅,哺乳动物手术器械,注射器,试管架,试管试管夹,微量移液器,量筒实验药品和试剂:20%氨基甲酰乙酯,0.6%酚红溶液,20%葡萄糖溶液,10%Na0H,12.5%Na0H溶液,50%乙酸溶液,1%氯化汞,碱性你苦味酸,生理盐水,肌酐标准应用液,蒸馏水实验动物家兔实验步骤1.1急性肾功能

2、不全模型复制:于实验前24h,取两只家兔,称重,一只作为实验兔,按0.81.0ml/kg体重剂量皮下或肌肉注射10g/L氯化汞造成急性肾功能不全备用,另一只皮下注射或肌肉注射等量的生理盐水作为对照兔。1.2麻醉固定:用200g/L氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重剂量注射耳缘静脉,缓慢注射。待兔麻醉后将其仰卧,先后固定四肢及兔头。1.3心脏采血:剪去家兔胸前区部位的毛,在第34肋间靠近胸骨处,用左手食指摸到心跳最明显处,右手持注射器垂直刺入心脏,当针穿刺心脏时,血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器,取血3ml,推入干燥试管,静置。1.4膀胱插管术:从耻骨联合向上沿中线作约34厘米的切口,沿腹白线打

3、开腹腔,将膀胱轻拉至腹壁外,先辨认清膀胱和输尿管的解剖部位,先用注射器取尿液2ml于试管中,然后在输尿管下方穿线结扎尿道,再用止血钳提起膀胱前壁(靠近顶端部分),选择血管较少处,切一纵行小口,插入插管后结扎,将膀胱插管平放于耻骨处,引流管自然下垂,管口低于膀胱水平,排空膀胱,术毕,用温热生理盐水纱布覆盖腹部切口。然后准备小烧杯,收集尿液。1.5酚红排泄试验:按1ml/kg耳缘静脉注射0.6%酚红溶液,开始计时,再按30ml/kg耳缘静脉缓慢注射20%葡萄糖溶液。从注射酚红溶液起收集15分钟(对照组),30分钟(模型组)尿液。a. 1.6生化检测1.6.1测酚红排泄率收集注射酚红后的全部尿液移入

4、500ml量筒内,加入10%NaOH10ml,使之显色,再加入自来水至500ml摇匀。b. 从量筒中吸出尿液置于试管中,与标准管比色管进行比较,即为15min、30min酚红排泄率。1.6.2测血肌酐将静置后心脏采血的血用离心机2000r/min离心5分钟,小心吸取血清置于另一干燥试管中,测血肌酐用。取硬质试管3支编号,分别为空白管、标准管及测定管。按表1加样,混匀,37C水浴30min,用分光光度计以波长510nm,空白调零,读OD值。然后各管液体倒回试管,加50%乙酸溶液两滴,静置6min后,再测0D值。按公式Cr(mg%)=(OD-OD)/(OD-OD)X0.01/0.2X100(正常值

5、=0.70.8mg%)测测标标表1血清肌酐测定单位/ml空白管标准管测定管肌酐标准应用液/(0.05mg/ml)0.2血清0.2蒸馏水0.2碱性苦味酸2.02.02.01.6.3测尿肌酐按表2中步骤操作混匀,放10min后加蒸馏水6.0ml,摇匀,用分光光度计以波长530nm,空白调零,读取OD值,按公式计算尿肌酐值Crp(mg%)=0D/ODX0.05mgX100ml/0.1ml测标表2尿肌酐测定单位/ml空白管标准管测定管尿液(原尿或1:50稀释)0.1尿肌酐标准应用液0.1蒸馏水0.1碱性苦味酸2.02.02.012.5%NaOH溶液0.50.50.51.6.4内生肌酐清除率内生肌酐清除

6、率=尿中肌酐含量/血中肌酐含量X尿量(ml/min)1.7肾形态学观察:于耳缘静脉注射10ml空气处死家兔,解剖取出肾脏,沉重,计算肾脏与体重之比(即肾系数),并观察肾外形、质地,包膜,最大径纵向剖开肾脏,观察肾切面包膜、肾实质色泽、皮髓质结构改变。实验结果:家兔的血肌酐、尿肌酐数据表管号对照组模型组血肌酐-尿肌酐血肌酐尿肌酐加乙酸前加乙酸后加乙酸前加乙酸后标准管0.4230.0520.4610.0510.0160.181测定管0.0560.0490.1570.1500.0400.086对照组和模型组家兔各项生化指标血清肌酐Crp(mg%)尿肌酐Cru(mg%)尿肌酐/血肌酐酚红排泄率()肾比

7、重(g/kg)内生肌酐清除率对照组9.47.850.83458.790.0835模型组15.74.30.2757.330.0054不同浓度标准比色液分光光度值排泄率(%)5101520253035404550OD值0.010.0340.0650.1130.1340.1640.1780.2720.2840.312不同浓度标准比色液分光光度值标准曲钱图y=0.0069x-0.0335结果说明:与正常组的家兔对比,急性肾功能不全的家兔血清肌酐升高,尿肌酐明显降低,每分钟的尿量减少,内生肌酐清除率明显下降,酚红排泄率下降,肾系数降低(由于实验中结扎尿道时不慎将输尿管结扎,造成尿路梗阻,肾脏积水,以致对

8、照组肾系数大于模型组)。正常肾脏颜色为红褐色,切面色泽鲜艳,皮髓质分界清晰。模型组的家兔肾脏重量增加,肾脏颜色苍白,表面肿胀,切面为苍白色,皮髓质分界不清,偶有淤血。实验讨论:1. 氯化汞是一类具有较强毒性的重金属盐,溶于水,其中的汞离子可使含巯基的酶丧失活性,失去功能;还能与酶中的氨基、二巯基、羧基、羟基以及细胞内的磷酰基结合,引起相应的损害。家兔皮下或肌肉注射1%氯化汞,可引起以肾小管坏死为主的急性肾功能不全。急性肾功能不全临床分为少尿型和非少尿型两种,前者多见。少尿型一般表现少尿甚至无尿、等渗尿。血浆肌酐进行性升高,肌酐从尿中排出障碍,尿肌酐/血肌酐20,与功能性肾衰时40有明显区别.2

9、. 氯化汞引起家兔急性肾功能不全的机制:(1)管内的NaCl增加,刺激致密斑使肾素分泌增加,肾素-血管紧张素系统激活,血管紧张素II增加,从而使入球小动脉收缩,肾小球毛细血管血压下降,肾小球有效滤过压下降,肾小球滤过率下降,导致少尿。(2)肾小管阻塞:当HgCl2引起急性肾小管上皮细胞坏死时,管型、细胞碎片或细胞肿胀等阻塞肾小管,直接引起少尿;另一方面,近端肾小管阻塞,肾小囊内压升高,有效滤过压下降,肾小球滤过率降低,尿量减少。(3)原尿回漏和肾间质水肿:肾小管上皮细胞受损,基膜断裂,原尿到达肾小管时便回漏到肾间质,而后进入肾血管,直接使尿量减少。肾间质水肿和间质压增高,一方面使有效滤过压下降

10、,导致肾小球滤过率降低,尿量减少;另一方面,压迫肾血管,妨碍尿液流入肾小管压迫肾周围毛细血管,导致肾缺血,进一步引起少尿。3. 急性肾功能衰竭时的功能代谢变化:(本实验中毒家兔处于少尿期)(1) 尿变化:少尿或无尿;低比重尿;尿钠高;血尿、蛋白尿、管型尿。(2) 水中毒:ARF时,因少尿、分解代谢所致内生水增多、摄入水过多等原因,导致体内水潴留、稀释性低钠血症和细胞水肿。严重时可出现心功能不全、肺水肿和脑水肿。(3) 高钾血症:尿量减少使钾随尿排出减少;组织损伤和分解代谢增强,使钾大量释放到细胞外液;酸中毒时,细胞内钾离子外溢;低钠血症,使远端小管的钾钠交换减少。(4) 代谢性酸中毒:GFR降

11、低,使酸性代谢产物在体内蓄积;肾小管分泌H+和NH3能力降低,使NaHCO3重吸收减少;分解代谢增强,固定酸产生增多。(5) 氮质血症:血中尿素、肌酐、尿酸等非蛋白氮含量显著增高,称氮质血症,其发生主要是由于肾脏排泄功能障碍和体内蛋白质分解增加所致,少尿期,氮质血症进行性加重,严重时可出现尿毒症。4. 内生肌酐清除率(80120ml/min)测定的临床意义:肌酐是肌酸代谢的最终产物,体内的肌酸大部分与磷酸结合生成磷酸肌酸,磷酸肌酸与能量代谢有关。在体外肌酐与肌酸可以互变,在酸性溶液中,肌酸及易脱水而变成肌酐,在碱性溶液中,肌酐则可变回肌酸。但是,在体内肌酸脱水生成肌酐是一种不可逆反应。(1)

12、判断肾小球损害的敏感指标:多数急性肾小球肾炎内生肌酐清除率低到正常值的80%以下,但血清尿素氮、肌酐测定仍在正常范围,故是较早的反映肾小球滤过功能的敏感指标。(2) 初步估价肾脏的损害程度:轻度损害Ccr在7051ml/min;中度损害在5030ml/min;小于30ml/min为重度损害;慢性肾功能衰竭病人若清除率在20llml/min为早期肾功能衰竭;106ml/min为晚期肾功能衰竭;小于5ml/min为终末期肾功能衰竭。(3) 指导治疗:内生肌酐清除率为3040ml/min,应限制蛋白质摄入;小于30ml/min噻嗪类利尿剂治疗常无效;小于10ml/min应结合临床进行透析治疗,对袢利

13、尿剂(如速尿、利尿酸钠)的反应也已极差。(4) 慢性肾炎临床分型的参考:如慢性肾炎普通型Ccr常降低,肾病型Ccr常偏高。5. 尿肌酐/血肌酐比值:功能性肾衰40,器质性肾衰20。功能性肾衰(也叫肾前性肾衰)由肾的灌流不足引起,使肾血流量和肾小球滤过率下降,但内生肌酐在体内积聚不多;器质性肾衰由肾小球滤过率下降、肾小管坏死引起,内生肌酐不能从尿中排出,从而使血肌酐浓度急剧升高。氯化汞中毒导致肾小管上皮细胞损伤,尿量减少,酚红排泄率降低。酚红排泄率是反映肾血流量与肾小管排泌功能的指标。注射大量的葡萄糖溶液是为了造成渗透性利尿,利于排除酚红。酚红是一种对人体无害的红色染料,经静脉注射后,大部分与血

14、浆蛋白结合,除20%为肝脏清除,经胆道排出外,其余则由肾脏排出。在肾脏的排泌过程中,94%由近曲小管上皮细胞主动排泌,小部分不与白蛋白结合者可从肾小球滤过,尿中排出4%左右,2%通胆汁到大肠由粪便排出,因为酚红大部分通过近曲小管分泌、排出,所以其尿中排出量,可作为判断近曲小管排泌功能的指标。氯化汞中毒导致肾小管上皮细胞损伤,尿量减少,酚红排泄率降低。6. 肾形态观察:(1)正常家兔:表面光滑,皮质红褐色,髓质淡红色,皮髓质纹理清楚。(2)中毒家兔:重量增加,体积增大,包膜紧张,皮质肿胀苍白,纹理不清,髓质充血。实验结论:氯化汞中毒导致的急性肾功能不全时,家兔尿肌酐/血肌酐VI,酚红排泄率降低;肾脏的主要病理改变为肾脏肿大、颜色苍白、重量增加;切面皮质苍白、髓质呈暗红色参考文献:1 .陆源,林国华,杨午鸣.机能学实验教程M.第2版.北京:科学出版社,2010:165.2 .金惠铭,王建枝.缺氧.病理生理学.第7版.人民卫生出版社。2010.程一雄等编著,急性肾功能衰竭,上海科学技术出版社,1963年11月第1版,第154页.周苏廉,黄学顺,陈茂华.HgCl_2诱发家兔急性肾衰竭模型(第一部分)江西医学院学报,1981,(01).杨水莲,李晓军,冯克玉,等.我国汞中毒临床研究概况。【】中国职业医学,2004,31:50-52.

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