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1、word生物化学与分子生物学重点第一章 绪论第二章 蛋白质的结构与功能第三章 核酸的结构与功能第四章 酶第五章 糖代谢第六章 脂类代谢第七章 生物氧化第八章 氨基酸代谢第九章 核苷酸代谢第十章 DNA的生物合成第十一章 RNA的生物合成第十二章蛋白质生物合成第十三章 基因表达调控第十四章 基因重组和基因工程第十五章 细胞信息传递第十六章 癌基因和抑癌基因第十七章 分子生物学常用技术第一章 绪论 一、生物化学的的概念：生物化学biochemistry)是利用化学的原理与方法去探讨生命的一门科学，它是介于化学、生物学与物理学之间的一门边缘学科。二、生物化学的开展：1表示生物化学阶段：是生物化学开展
2、的萌芽阶段，其主要的工作是分析和研究生物体的组成成分以与生物体的分泌物和排泄物。2动态生物化学阶段：是生物化学蓬勃开展的时期。就在这一时期，人们根本上弄清了生物体内各种主要化学物质的代谢途径。3分子生物学阶段：这一阶段的主要研究工作就是探讨各种生物大分子的结构与其功能之间的关系。 三、生物化学研究的主要方面：1生物体的物质组成：高等生物体主要由蛋白质、核酸、糖类、脂类以与水、无机盐等组成，此外还含有一些低分子物质。 2物质代谢：物质代谢的根本过程主要包括三大步骤：消化、吸收中间代谢排泄。其中，中间代谢过程是在细胞内进展的，最为复杂的化学变化过程，它包括合成代谢，分解代谢，物质互变，代谢调控，能
3、量代谢几方面的内容。 3细胞信号转导：细胞内存在多条信号转导途径，而这些途径之间通过一定的方式方式相互交织在一起，从而构成了非常复杂的信号转导网络，调控细胞的代谢、生理活动与生长分化。 4生物分子的结构与功能：通过对生物大分子结构的理解，揭示结构与功能之间的关系。 5遗传与繁殖：对生物体遗传与繁殖的分子机制的研究，也是现代生物化学与分子生物学研究的一个重要内容。 第二章 蛋白质的结构与功能一、氨基酸：1结构特点：氨基酸(amino acid)是蛋白质分子的根本组成单位。构成天然蛋白质分子的氨基酸约有20种，除脯氨酸为-亚氨基酸、甘氨酸不含手性碳原子外，其余氨基酸均为L-氨基酸。 2分类：根据氨
4、基酸的R基团的极性大小可将氨基酸分为四类： 非极性中性氨基酸(8种)； 极性中性氨基酸(7种)； 酸性氨基酸(Glu和Asp)； 碱性氨基酸(Lys、Arg和His)。 二、 肽键与肽链：肽键(peptide bond)是指由一分子氨基酸的-羧基与另一分子氨基酸的-氨基经脱水而形成的共价键(-CO-NH-)。氨基酸分子在参与形成肽键之后，由于脱水而结构不完整，称为氨基酸残基。每条多肽链都有两端：即自由氨基端(N端)与自由羧基端(C端)，肽链的方向是N端C端。 三、肽键平面(肽单位)：肽键具有局部双键的性质，不能自由旋转；组成肽键的四个原子与其相邻的两个碳原子处在同一个平面上，为刚性平面结构，称
5、为肽键平面。 四、蛋白质的分子结构：蛋白质的分子结构可人为分为一级、二级、三级和四级结构等层次。一级结构为线状结构，二、三、四级结构为空间结构。 1一级结构：指多肽链中氨基酸的排列顺序，其维系键是肽键。蛋白质的一级结构决定其空间结构。 2二级结构：指多肽链主链骨架盘绕折叠而形成的构象，借氢键维系。主要有以下几种类型： -螺旋：其结构特征为：主链骨架围绕中心轴盘绕形成右手螺旋；螺旋每上升一圈是3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm； 相邻螺旋圈之间形成许多氢键； 侧链基团位于螺旋的外侧。 影响-螺旋形成的因素主要是： 存在侧链基团较大的氨基酸残基； 连续存在带一样电荷的氨基酸残基； 存在脯氨酸残
6、基。 -折叠：其结构特征为： 假如干条肽链或肽段平行或反平行排列成片； 所有肽键的C=O和NH形成链间氢键；侧链基团分别交替位于片层的上、下方。 -转角：多肽链180回折局部，通常由四个氨基酸残基构成，借1、4残基之间形成氢键维系。 无规卷曲：主链骨架无规律盘绕的局部。 3三级结构：指多肽链所有原子的空间排布。其维系键主要是非共价键次级键：氢键、疏水键、X德华力、离子键等，也可涉与二硫键。 4四级结构：指亚基之间的立体排布、接触部位的布局等，其维系键为非共价键。亚基是指参与构成蛋白质四级结构的而又具有独立三级结构的多肽链。 五、 蛋白质的理化性质：1两性解离与等电点：蛋白质分子中仍然存在游离的
7、氨基和游离的羧基，因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解离的性质。蛋白质分子所带正、负电荷相等时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。 2蛋白质的胶体性质：蛋白质具有亲水溶胶的性质。蛋白质分子外表的水化膜和外表电荷是稳定蛋白质亲水溶胶的两个重要因素。 3蛋白质的紫外吸收：蛋白质分子中的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基对紫外光有吸收，以色氨酸吸收最强，最大吸收峰为280nm。 4蛋白质的变性：蛋白质在某些理化因素的作用下，其特定的空间结构被破坏而导致其理化性质改变与生物活性丧失，这种现象称为蛋白质的变性。引起蛋白质变性的因素有：高温、高压、电离辐射、超声波、紫外线与有机溶剂、重金属盐、强酸强碱等。绝大多数蛋白质
8、分子的变性是不可逆的。 六、蛋白质的别离与纯化：1盐析与有机溶剂沉淀：在蛋白质溶液中参加大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析。常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。盐析时，溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可引起蛋白质沉淀。 2电泳：蛋白质分子在高于或低于其pI的溶液中带净的负或正电荷，因此在电场中可以移动。电泳迁移率的大小主要取决于蛋白质分子所带电荷量以与分子大小。 3透析：利用透析袋膜的超滤性质，可将大分子物质与小分子物质别离开。 4层析：利用混合物中各组分理化性质的差异，在相互接触的两相固
9、定相与流动相之间的分布不同而进展别离。主要有离子交换层析，凝胶层析，吸附层析与亲和层析等，其中凝胶层析可用于测定蛋白质的分子量。 5超速离心：利用物质密度的不同，经超速离心后，分布于不同的液层而别离。超速离心也可用来测定蛋白质的分子量，蛋白质的分子量与其沉降系数S成正比。 七、氨基酸顺序分析：蛋白质多肽链的氨基酸顺序分析，即蛋白质一级结构的测定，主要有以下几个步骤： 1. 别离纯化蛋白质，得到一定量的蛋白质纯品； 2. 取一定量的样品进展完全水解，再测定蛋白质的氨基酸组成； 3. 分析蛋白质的N-端和C-端氨基酸； 4. 采用特异性的酶如胰凝乳蛋白酶或化学试剂如溴化氰将蛋白质处理为假如干条肽段
10、； 5. 别离纯化单一肽段； 6. 测定各条肽段的氨基酸顺序。一般采用Edman降解法，用异硫氰酸苯酯进展反响，将氨基酸降解后，逐一进展测定； 7. 至少用两种不同的方法处理蛋白质，分别得到其肽段的氨基酸顺序； 8. 将两套不同肽段的氨基酸顺序进展比拟，以获得完整的蛋白质分子的氨基酸顺序。 第三章 核酸的结构与功能一、核酸的化学组成：1含氮碱：参与核酸和核苷酸构成的含氮碱主要分为嘌呤碱和嘧啶碱两大类。组成核苷酸的嘧啶碱主要有三种尿嘧啶U、胞嘧啶C和胸腺嘧啶T，它们都是嘧啶的衍生物。组成核苷酸的嘌呤碱主要有两种腺嘌呤A和鸟嘌呤G，它们都是嘌呤的衍生物。 2戊糖：核苷酸中的戊糖主要有两种，即-D-
11、核糖与-D-2-脱氧核糖，由此构成的核苷酸也分为核糖核苷酸与脱氧核糖核酸两大类。 3核苷：核苷是由戊糖与含氮碱基经脱水缩合而生成的化合物。通常是由核糖或脱氧核糖的C1-羟基与嘧啶碱N1或嘌呤碱N9进展缩合，故生成的化学键称为，N糖苷键。其中由D-核糖生成者称为核糖核苷，而由脱氧核糖生成者如此称为脱氧核糖核苷。由“稀有碱基所生成的核苷称为“稀有核苷。假尿苷就是由D-核糖的C1 与尿嘧啶的C5相连而生成的核苷。 二、核苷酸的结构与命名：核苷酸是由核苷与磷酸经脱水缩合后生成的磷酸酯类化合物，包括核糖核苷酸和脱氧核糖核酸两大类。最常见的核苷酸为5-核苷酸5 常被省略。5-核苷酸又可按其在5位缩合的磷酸
12、基的多少，分为一磷酸核苷核苷酸、二磷酸核苷和三磷酸核苷。 此外，生物体内还存在一些特殊的环核苷酸，常见的为环一磷酸腺苷cAMP和环一磷酸鸟苷cGMP，它们通常是作为激素作用的第二信使。 核苷酸通常使用缩写符号进展命名。第一位符号用小写字母d代表脱氧，第二位用大写字母代表碱基，第三位用大写字母代表磷酸基的数目，第四位用大写字母P代表磷酸。 三、核酸的一级结构：核苷酸通过3,5-磷酸二酯键连接起来形成的不含侧链的多核苷酸长链化合物就称为核酸。核酸具有方向性，5-位上具有自由磷酸基的末端称为5-端，3-位上具有自由羟基的末端称为3-端。 DNA由dAMP、dGMP、dCMP和dTMP四种脱氧核糖核苷
13、酸所组成。DNA的一级结构就是指DNA分子中脱氧核糖核苷酸的种类、数目、排列顺序与连接方式。RNA由AMP，GMP，CMP，UMP四种核糖核苷酸组成。RNA的一级结构就是指RNA分子中核糖核苷酸的种类、数目、排列顺序与连接方式。 四、DNA的二级结构：DNA双螺旋结构是DNA二级结构的一种重要形式，它是Watson和Crick两位科学家于1953年提出来的一种结构模型，其主要实验依据是Chargaff研究小组对DNA的化学组成进展的分析研究，即DNA分子中四种碱基的摩尔百分比为A=T、G=C、A+G=T+CChargaff原如此，以与由Wilkins研究小组完成的DNA晶体X线衍射图谱分析。
14、天然DNA的二级结构以B型为主，其结构特征为：为右手双螺旋，两条链以反平行方式排列；主链位于螺旋外侧，碱基位于内侧；两条链间存在碱基互补，通过氢键连系，且A-T、G-C碱基互补原如此； 螺旋的稳定因素为氢键和碱基堆砌力；螺旋的螺距为3.4nm，直径为2nm。 五、DNA的超螺旋结构：双螺旋的DNA分子进一步盘旋形成的超螺旋结构称为DNA的三级结构。 绝大多数原核生物的DNA都是共价封闭的环状双螺旋，其三级结构呈麻花状。 在真核生物中，双螺旋的DNA分子围绕一蛋白质八聚体进展盘绕，从而形成特殊的串珠状结构，称为核小体。核小体结构属于DNA的三级结构。 六、DNA的功能：DNA的根本功能是作为遗传
15、信息的载体，为生物遗传信息复制以与基因信息的转录提供模板。 DNA分子中具有特定生物学功能的片段称为基因gene。一个生物体的全部DNA序列称为基因组genome。基因组的大小与生物的复杂性有关。 七、RNA的空间结构与功能： RNA分子的种类较多，分子大小变化较大，功能多样化。RNA通常以单链存在，但也可形成局部的双螺旋结构。 1mRNA的结构与功能：mRNA是单链核酸，其在真核生物中的初级产物称为HnRNA。大多数真核成熟的mRNA分子具有典型的5-端的7-甲基鸟苷三磷酸m7GTP帽子结构和3-端的多聚腺苷酸(polyA)尾巴结构。mRNA的功能是为蛋白质的合成提供模板，分子中带有遗传密码
16、。mRNA分子中每三个相邻的核苷酸组成一组，在蛋白质翻译合成时代表一个特定的氨基酸，这种核苷酸三联体称为遗传密码coden。 2tRNA的结构与功能：tRNA是分子最小，但含有稀有碱基最多的RNA。tRNA的二级结构由于局部双螺旋的形成而表现为“三叶草形，故称为“三叶草结构，可分为五个局部：氨基酸臂：由tRNA的5-端和3-端构成的局部双螺旋，3-端都带有-CCA-OH顺序，可与氨基酸结合而携带氨基酸。DHU臂：含有二氢尿嘧啶核苷，与氨基酰tRNA合成酶的结合有关。反密码臂：其反密码环中部的三个核苷酸组成三联体，在蛋白质生物合成中，可以用来识别mRNA上相应的密码，故称为反密码anticoden。 TC臂：含保守的TC顺序
