免疫组化用户自备试剂：1 •粘片剂APES或POLY-L-LYSINE (博士德公司有售)2. 免疫组化专用PBS (pH7.2-7.6)配法:1000ml蒸馏水中加氯化钠& 5g, Na2HP04 2.8g,NaH2P04 0.4g如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量3. 0.01M枸橼酸盐缓冲液：1000ml蒸馏水中加枸橼酸三钠(C6H5Na307・2H20) 3g,枸橼 酸(C6H807 ・ H2O ) 0.4g4. DAB 显色试剂盒(博士德公司有售)A.石蜡切片热修复抗原染色程序：1. 载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine捞片后置烤箱58-60 °C30-60分 以使切片紧密粘附2. 切片常规脱蜡至水脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60 ° C恒温箱中烘烤20min然后按下 列步骤进行：1) 组织切片置于二甲苯中浸泡3 次，每次10 min ；2) 无水乙醇中浸泡3 次，每次10 min ；3) 依次通过质量分数为95% 、70% 、50% 的梯度乙醇溶液，每次 10 min ；4) PBS 中浸泡 10 min 3. 30%H2O2 1 份+蒸馏水 10 份混合,室温 5-10 分钟以灭活内源性酶。
蒸馏水(可用 PBS) 洗 3 次4. 热修复抗原:将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后 断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次冷却后PBS (pH7.2-7.6)洗涤1-2次5. 滴加 5%BSA 封闭液, 室温 20 分钟甩去多余液体, 不洗6. 滴加适当稀释的一抗(小鼠或兔IgG)，37 C 1小时左右或20C时2小时左右也 可4C过夜PBS (pH7.2-7.6)洗2分钟X3次一抗的稀释度、孵育时间和温度与染 色强度、背景有直接关系一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育 时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)7. 滴加生物素化山羊抗小鼠IgG(或兔、人IgG),20-37C 20分钟PBS (pH7.2-7.6) 洗 2分钟X3次8. 滴加试剂 SABC,20-37C 20 分钟PBS (pH7.2-7.6) 洗 5 分钟 X4 次9. DAB显色:使用DAB显色试剂盒(AR1022)取1ml蒸馏水，加试剂盒中A,B,C试剂各1 滴, 混匀后加至切片室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30 分钟之间也可自配显 色剂显色。
蒸馏水洗涤10. 苏木素轻度复染脱水，透明，封片显微镜观察注意事项：1. 如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN20的PBS (pH7.2-7.6)洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色2. 热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0)；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲 液0.01M PBS 缓冲液：NaCl 1.9g, KCl 0.2g, Na HPO 1.44g, KH PO 0.19g，溶2 4 2 4于800mL蒸馈水中，调PH值至7.3lOxPBS： NaCl 80g, KCl 2.0g, Na HP0 ・12H 0 28.9g, KH PO 2.0g,加水至2 4 2 2 4 ，lOOOmLPH 7.2-7.4封闭液：封闭用血清 1mL, O.O1M PBS 缓冲液9 mL3%H202:甲醇 45mL, 30%H 0 5mL221、 Mayer 苏木素染液配制苏木素0.1 g,硫酸铝钾5 g,柠檬酸0. 1g，水合氯醛5 g,碘酸钠20 mg,蒸馏水100 ml配制方法：先将硫酸铝钾5 g加入100 ml蒸馏水中加热 溶化，再加入苏木素0.1 g,搅拌至充分溶解直至沸腾，再依次加入柠檬酸0.1 g和水合氯醛5 g和碘酸钠20 mg,使之充分溶解，冷却后过滤待用。
Mayer 苏木素染液将经免疫组织化学法显色后的切片放入自来水冲洗,然后放入 Mayer 苏木 精液浸染5 min,自来水冲洗，后饱和碳酸锂转兰，再经1%盐酸乙醇分化，镜 下观察后,将切片立即放入自来水中冲洗,直至细胞核变蓝而胞浆及周围组织 无附着色,常规脱水封片2、 Harris苏木精液:苏木精0.5g,硫酸招钾15g,无水乙醇lOmr混合后加热, 幵始沸腾后取红色的氧化束0.6g每次少量加入，然后再沸腾20min冷却后放 置一夜, 过滤后保存使用时将原液 20ml 加入硫酸锅按饱和溶液 80ml 稀释这 种稀释液反复使用,每天实验前过滤一次再用3、 0.5%盐酸酒精溶液配制：浓盐酸0.5ml,70%酒精99ml将两溶液混勻4 以配 200ml 苏木素复染液举例：苏木素lg、100%乙醇10ml、钾明矶20g、蒸馏水200ml、氧化汞20g先将苏木素溶于 100%乙醇,将钾明矾加温溶于蒸馏水中待钾明矾完全溶 解,与苏木素乙醇溶液混合煮沸加氧化汞,玻璃棒搅拌,溶液变为深紫色时 将烧杯放于流动冷水中,使液体立即冷却,隔日过滤使用时 200ml 再加醋酸 4ml,可增强期染色力5 改良的 Harris 苏木素液： 200mlA 液：苏木素 1g 无水酒精 10mlB 液：硫酸铝钾 20g 蒸馏水 200ml步骤：两液分别溶解后混合，加热煮沸后，徐徐加入红色氧化汞0.5g,此 时有大量气泡产生，故容器宜大，以防液体溢出，然后将染液迅速冷却，过滤 后，每100ml加入冰醋酸6ml，并加入甘油（丙三醇）10ml。