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1、鼠李糖脂的提取与纯化：用Imol/LNaOH调培养48h发酵液（发酵时间待定） 的 pH 值至 8.0 后 8000r/min 离心 10min 除菌体，上清液用 36%HCl 调 pH 值至 2.0,然后以V（上清液）:V（氯仿）:V（甲醇）=321萃取15min,静置分层，收集下层 液用旋转蒸发仪（50C ）浓缩至50ml，溶剂自然挥发干后即得纯鼠李糖脂。将 鼠李糖脂溶于0.05mol/LNaHCO3溶液中得鼠李糖脂溶液。之前的这种提取方法可以得到纯的鼠李糖脂。关于发酵液中鼠李糖脂的含量检测。有文献提到用电喷雾质谱 ESI-MS 来检 测鼠李糖脂的含量。还有一种主要用分光光度计和标准曲线的
2、方法来做。如下：一、材料、仪器及方法鼠李糖、苯酚、浓硫酸、尿素、Na2HPO4、KIP04、Mgs04 7H20、CaC12 -2H20 均为国产分析纯。紫外可见分光光度仪。鼠李糖标准母液的配制：取鼠李糖于105 C烘干至衡重，精确称取25 mg 溶于250 mL容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀即得0.10 g/L鼠李糖标准母液。苯酚溶液的配制：苯酚用水浴加热后溶解，称取100 g，加铝片0.10 g，氢 氧化钠0.05 g，蒸馏收集182 C的馏分。取馏出液6.00 g，加水100 mL，置于 棕色瓶中，备用。样品的测定：种子培养基接种生物表面活性剂产生菌LY4，发酵16 h，此时 菌株处于对数生
3、长中后期，以此时的发酵液作为种子液。接种量5%, 200 r/min 240 r/min，发酵周期为2 d。将发酵液过滤除去过量的植物油（与他用的培养基 有关，其中添加了植物油，准确移取滤液0.5 mL稀释至100.0 mL，取2.0 mL 稀释液（按鼠李糖标准曲线绘制中的方法显色）于 482 nln 处测其吸光度值，同时 以蒸馏水作对照，由回归方程得鼠李糖的含量，鼠李糖的含量乘以相关系数 3 即为鼠李糖脂的产量。二、鼠李糖标准曲线的绘制分别移取鼠李糖标准母液2.5 mL、 5.0 mL、 7.5 mL、 10.0 mL、 12.5 mL、 15.0 mL、17.5 mL、20.0 mL于50
4、 mL容量瓶中，蒸馏水稀释定容。取2.0 mL标 准溶液，以蒸馏水作对照，分别加入1.0 mL 苯酚溶液，摇匀，迅速加入5.0 mL 浓硫酸，振摇5 min后于100C水浴中加热15 min，而后置于冰水中迅速冷却10min,于482 nnl处测其吸光度值，以吸光度值为纵坐标，鼠李糖质量浓度为横坐 标，绘制标准曲线（图2），线性回归得鼠李糖的标准曲线方程Y=16.514x+0.004 2, 相关系数=0.996 9。在鼠李糖质量浓度00.04 g/L，该方法线性关系良好。0.400.01 CW2 0.030040.0?口儼李勒虫 L图2标准曲线图Fi百.2Stanard eurveT=16.5M.r+0.004 2 fl:=f),996 9*三、 鼠李糖脂生物表面活性剂产生菌发酵液中总糖含量测定的较佳条件：添加5.0 mL硫酸和1.0 rnL配好的苯酚溶液，100 C二水浴中显色15 min，迅速冷却后于482 nm进行测定。吸收值与其质量浓度（在00.04 g/L）呈良好的 线性关系，相关系数为0.996 9,加样回收率为100.5%（n=5）。1 吴小红.鼠李糖脂在石油废水处理中的应用研究.硕士论文,20062 唐仕荣等.生物表面活性剂产生菌发酵液中糖含量的测定J.日用化学工业.2005,35(6):96-398
