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1、河北医科大学 硕士学位论文应用ELISPOT技术检测结核菌感染的研究 姓名：李峤珂 申请学位级别：硕士 专业：内科学 指导教师：张广宇吴雪琼 20070301 中文摘要 应用技术检测结核菌感染的研究 摘 要 目的：建立应用酶联免疫斑点（ ，）技术检测结核菌感染的方法，初步研制酶联免疫斑点试剂盒（简称自制试剂盒），并评价其在结核病诊断临床中的应用价值。 方法：选择例非结核感染志愿者，例结核病人和例结核菌素纯蛋白衍生物（）皮肤试验强阳性、无任何结核病临床症状且相关检查结果无异常的志愿者，用英国 公司研制的 试剂盒（简称试剂盒）检验。 根据结核杆菌特异的效应淋巴细胞在特异抗原的刺激下分泌干扰素（），
2、检测可以确定体内是否存在对结核杆菌反应的效应淋巴细胞的原理，建立应用技术检测结核菌感染的方法。预先用单克隆抗体包被孔硝酸纤维素膜板，用密度梯度离心法分离被检测者外周血单核细胞，加入孔板中，用特异性重组蛋白和筒融合蛋白刺激，活化细胞，结核杆菌特异的效应淋巴细胞将分泌，然后加入生物素标记的多克隆抗体作为检测抗体，再加入碱性磷酸酶（）标记的链亲和素，加入底物溶液显色，在板底形成肉眼可见的深蓝色斑点。每一个斑点代表一个分泌的淋巴细胞。根据体内是否存在结核杆菌效应淋巴细胞，对结核杆菌感染进行辅助诊断。 中文摘要 改变不同的实验条件确定应用技术检测结核杆菌感染方法的最佳细胞浓度、孵育时间，蛋白浓度等，初步
3、研制自制试剂盒。选择例非结核感染志愿者和例结核病人，均使用 试剂盒和自制试剂盒进行检验。将两者检测结果进行对比。 结果：用 试剂盒进行检验，例结核感染者的血样本检测结果（）阳性，（）阴性，例非结核感染者检测结果（）阴性， （）阳性。 改变不同的实验条件来确定自制试剂盒的各个合适的实验条件，结果表明： 细胞密度较为合适，孵育时间为实验条件，刺激结核致敏淋巴细胞的蛋白浓度“为实验条件。 用 试剂盒和自制试剂盒对例非结核感染者和例结核病人进行检测，结果（） 试剂盒与自制试剂盒检测结果相同，（）结果不同。对两种试剂盒检出结果行 检验，两者差异无显著性（），说明两种试剂盒对血样阳性检出率没有显著性差异。
4、例已确诊结核病人检测结果为 试剂盒 （）阳性，自制试剂盒（）阳性。例非结核感染者检测结果为： 试剂盒（）阳性，自制试剂盒（）阳性。自制试剂盒的敏感性略高于 试剂盒。自制试剂盒的假阳性率高于后者，但因所选病历中包括消化系统和血液肿瘤患者，以及老年人等免疫低下者，不排除其为结核潜伏感染者，因机体免疫力低下，对实验无反应。故尚需进一步的追踪阳性病 中文摘要例是否发病。自制试剂盒痰菌阳性组检测孔内斑点数显著高于痰菌阴性组检测孔（），说明痰菌阳性患者体内特异性分泌细胞数有不同程度提高。 结论：英国 公司研制的 试剂盒诊断结核病感染者的敏感度和特异性均较高；本研究建立了一种结核病细胞免疫诊断试剂盒，其诊断结核病感染者的敏感性和特异性与 试剂盒相似，且操作简便，花费小；在检测结核潜伏感染者敏感性和特异性均高于皮肤试验。 关键词：结核；诊断；干扰素；酶联免疫斑点法（） 英文摘要 （） ： （） ： ， ， ， 吖 一 ， ， 英文摘要， （） ， ， ， ， ， ， ， ：（ ， （） ， （） （） （， （） 荚文摘要 （） （） （） ， （）
