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1、蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法The manuscript was revised on the evening of 2021蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？ 蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼； 绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀； 还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归 要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果 也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己 的实验 “ 超能力 ” 吧。本文总结了蛋白纯
2、化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤， 供大家参考。锻炼属于我们自己的实验 “超能力”之一这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。蛋白质的溶 解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶 解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子， 破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。每 种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。 硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大
3、量的水分 子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因 此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术 进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。在实验中建议配置不同 梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。（1） 参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液；例如，在25 C条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸 铵固体，边搅拌边加入到1L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节 pH到。2） 沉淀蛋白将样品离心，去除沉淀，保留上清液并测量体积；一
4、边搅拌一边慢慢的加入硫 酸铵。接着，将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 h,或者4 C,搅拌过夜，使蛋白质 充分沉淀。加入硫酸铵有两种方式，一种是直接加入硫酸铵固体，在操作上速度缓 慢，不易太快，否则会造成蛋白变性；另一种方式是加入饱和的硫酸铵液体， 但若需要较高浓度的硫酸铵溶液，需要加入较大体积的饱和硫酸铵溶液，在后 续实验操作中，因蛋白质上清液和硫酸铵饱和溶液的体积之和过大，离心机无 法离心，因此根据需要加入的硫酸铵饱和溶液的体积选择合适的方法。另外，每种蛋白质沉淀所需要的硫酸铵溶液的浓度也不同，因此在每次实 验中应该做好观察记录，积累经验值。分享来自网上的一种简单的方法来估计 蛋白沉淀所需要的
5、硫酸铵溶液的浓度范围，供大家参考：将蛋白质溶液分成 5份，每份分别加入硫酸铵至浓度分别为 20%、30%、 40%、50%、60%，离心，弃蛋白质沉淀，留取上清，再向上清液中加入硫酸 铵，使得浓度从原先的 20%升高到 30%， 30%的浓度升到 40%， 40%的浓度升 为50%，离心保留沉淀，分析沉淀中是否含有目的蛋白，以此确定沉淀目的蛋白所需要的最佳硫酸铵溶液的浓度。（3） 透析除去硫酸铵将蛋白质溶液离心沉淀，弃上清保留沉淀。加入10-20 ml的PBS-叠氮化钠溶液溶解蛋白质，叠氮化钠不于蛋白质反应，但 能防止蛋白质变性。蛋白沉淀溶解之后，放入透析袋中透析24-48 h,每隔5 h更换透析液除去硫酸 铵。收集透析液，离心，测定上清中蛋白质的含量。友情提示：成长中的实验达人：从未犯错的人，从未试图创新。爱因斯坦所以做好详细的实验步骤，实验结果的分析，不断尝试，不断总结吧。
