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1、蛋白酶活性采用茚三酮比色法测定称取29过Im二筛的风干土样置于100ml三角瓶中。往三角瓶中加入 0.5ml甲苯,摇匀后放置15分钟。再加入10ml用pH7.4磷酸缓冲液 配制的白明胶溶液,将瓶塞紧,小心摇荡。将三角瓶置于30C恒温 箱中,培养24h。培养结束后,将瓶中悬液用致密滤纸过滤至另一三 角瓶中。吸取sml滤液于一试管中,加0.5mI0.IN硫酸和3mI20%硫 酸钠以沉淀蛋白质,然后再过滤到另一试管中。于上述试管中加入 Im120/0荀三酮溶液,将混合物仔细摇荡,并在煮沸的水浴上 加热10min。将着色液转移到50ml容量瓶中,并用蒸馏水稀释至刻 度。用光电比色计于560nm处进行比
2、色测定。实验设无土对照和无基 质对照。蛋白酶活性以24h后19 土壤中酶促反应后生成的甘氨酸毫 克数表示。中性磷酸酶活性采用磷酸苯二钠比色法测定取10.00g新鲜土壤(lmm)于100ml容量瓶中,加入1.5ml甲苯,室 温下静置15min,然后加10ml磷酸苯二钠溶液和ZOml柠檬酸缓冲溶 液,盖上瓶塞,充分混匀后,37 C下培养3h,用38.C去离子水定 容至IOOml,摇匀后迅速过滤。同时做空白对照,用10ml去离子水 代替磷酸苯二钠溶液。三次重复。取上述滤液卜4ml于50ml容量 瓶中,加2.5ml缓冲液,混匀后用去离子水稀释至大约4Oml,再加 0.5m12,6 一二滇2424酮氯亚按溶液,室温下20 一 3Omin,定容至 50ml,在600nm处比色测定。结果以24h后19 土壤中释放出的酚的 mg数表示。