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1、Folch法提取脂质1. 组织称重。2. 剪碎组织,按照1g组织加入20ml溶剂比例加入氯仿和甲醇(2:1 )混合溶液。混匀15-20m in后1 500一2000 r/mi门离心5min 收集溶液.3. 溶液加入0.2体积的水(20m丨溶液加4ml水)或0。9%NaCl溶液 清洗,涡旋几秒钟,以2 000rpm离心10m in得到两相液面。吸取 上清液,用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。如果有必要 (为移除标记分子),用甲醇和水(1: 1)清洗两相液交界面1至2 次,注意不要冲洗到下层液体内。4. 收集的下层液即氯仿层含有脂质,用N2吹干氯仿即得脂质。文献采用正相液相色谱法和大气压化学
2、电离质谱分析测定神经酰胺 时说按Fol ch法,以氯仿和甲醇(2:1,1: 1,1: 2)三个不同比例来 提取脂质,每种混合溶液提取2 小时.Bligh和Dyer的方法(也是我们之前用的方法)1. 皮肤组织称重,胰酶37C消化1h,用镊子分离表皮和真皮,弃 去真皮。2. 剪碎表皮组织,加入 3.75ml 氯仿和甲醇(1:2)混合溶液。匀浆 15mi n.加氯仿1o25m丨,混匀30s。再加水1。25 m丨,混匀 3 0s。3. 1500r/min离心1 5min,吸取下层氯仿层,收集在棕色小瓶中, 锋挥干溶剂,即得总脂质。注:本次试验For ch法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样,B&D法也 是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。预先准备好需要的溶剂、移液 管、棕色小瓶和离心管(离心管最好用玻璃的)。