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1、氨基酸薄层层析试验汇报 篇一：生物化学试验-氨基酸分析试验汇报试验汇报第一部分（预习汇报内容）：试验原理、试验材料（包含试验样品、关键试剂、关键仪器和器材）、试验步骤（包含试验步骤、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX一、预习汇报? 试验原理：依据固定相基质的形式，层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。薄层层析是在玻璃或塑料等光滑表面铺一层很薄的基质进行层析。薄层层析（thin layer chromatography，TLC）：是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层（固定相），再把样品点在薄层板一端，再把板的这端浸入合适的溶剂（流动相）在薄层板上扩展。并在此过程中经过吸附解吸附再吸附再解
2、吸附的重复进行，而将样品各组份分离出来。此次试验：? 详细原理：当流动相在固定相上流动时，因为吸附剂对不一样氨基酸的吸附力不一样，不一样氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品伴随展开剂的移动速率也不一样，因此能够相互分开。? 吸附剂（固定相）：硅胶（C.P.）。为使制成的薄层板不易松散，加入5%羟甲基纤维素钠（CMCNa）作黏合剂。? 展开剂：正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液（80:10:10,V/V/V）。 ? 展层-显色剂：根据10:1百分比（V/V）混匀的展开剂和0.1%茚三酮溶液。 ? 活化（activation）：在一定温度下，对吸附剂硅胶加热去除水分。可使硅胶的
3、活性提升，吸附能力加强。? 氨基酸和茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原。此产物和氨基酸加热分解产生的氨结合，和另一分子水合茚三酮缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。 ? Rf值：Rf?斑点中心到样品原点的距离对应溶剂前沿到样品原点的距离因为物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的。所以能够依据Rf值来判定被分离的物质。 ?试验材料：? 样品：1、0.01mol/L丙氨酸; 2、 0.01mol/L精氨酸; 3、0.01mol/L甘氨酸; 4、混合氨基酸溶液。 ? 试剂： 1、硅胶（C.P.）2、0.5%羟甲基纤维素钠（CMCNa）3、层展
4、-显色剂：根据10:1百分比（V/V）混匀的展开剂（正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液（80:10:10,V/V/V）和0.1%茚三酮溶液。 ? 仪器及器材： 1、层析版（6cm15cm） 2、小烧杯 3、量筒（10ml） 4、刻度尺 5、铅笔 6、毛细玻璃管 7、层析缸 8、烘箱 9、天平 10、药匙?试验步骤：? 试验步骤：?操作步骤： ? 注意事项：1、玻璃板要清洁平整无油污；2、去掉玻璃板侧缘的硅胶粉，不然层析时会有较强的边缘效应；3、点样时轻触疾起，避免反复点样和斑点过大产生交叉和拖尾；4、毛细玻璃管用完放回原来的烧杯里；5、避免用手接触层析板，避免用手握层析板的下半部分；6、层析板放入
5、层析缸时底端应放置水平，以防倾斜放置使展层方向和薄板下缘不垂直，不好处理数据；7、样点不能浸入到溶液中；8、层析缸盖应作密封处理预防挥发。试验汇报第二部分（试验统计）：关键试验条件（如材料的、质量；试剂的规格、用量、浓度；试验时间、操作关键点中的技巧、失误等，方便总坚固验时进行查对和作为查找成败原因的参考依据）；试验中观察到的现象（如加入试剂后溶液颜色的改变）；原始试验数据。评分（满分20分）：XX二、试验统计（一共做了两组试验，以作对照）? 关键试验条件：? 材料： 1、硅胶（C.P.）2、玻璃板。要求洁净干燥。 ? 试剂：1、0.5%的羧甲基纤维素钠8ml2、0.01mol/L丙氨酸、精氨
6、酸、甘氨酸、混合氨基酸溶液。各取毛细管2cm高左右，扩散不超2mm3、展层-显色液，层析缸内深度1-2cm ? 操作关键点：1、制板时，尽可能快地将混合匀浆倒在玻璃板上，易于铺匀。2、层析板晾干时尽可能保持水平，避免强风猛吹，不然制作的板厚薄不均。 3、活化时烘干以后面无水渍为准。 4、点样时要轻触疾起。5、点样完成将层析板放入层析缸时，要保持层析板下缘水平。 6、展层-显色剂液面应低于点样线，展层剂前沿大约跑到1/2处时取出7、避免手触碰层析板和点样端边缘。篇二：氨基酸的薄层层析试验4氨基酸的薄层层析一、试验原理薄层层析是一个将固定相在固体上铺成薄层进行层析的方法。因为该方法含有操作简便、层
7、析展开时间短、灵敏度高、结果可视化等优点，已被广泛应用于生物化学、医药卫生、化学工业、农业生产和食品等领域，对天然化合物的分离和判定也已广泛应用。薄层层析时通常将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，因为吸附剂对不一样氨基酸的吸附力不一样，不一样氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品伴随展开剂的移动速率也不一样，因此能够相互分开。即经过吸附-解吸-再吸附-再解吸的重复进行，而将样品各组分分离开。本试验应用硅胶作为固相支持物，用羧甲基纤维素钠作为粘合剂，以正丁醇、冰醋酸及水的混合液为展开剂，测定混合氨基酸中各分离斑点的Rf值（Rf值详
8、见第一篇第三章第五节），以分离和判别混合氨基酸的成份。氨基酸的显色反应：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它和氨基酸发生羧基反应生成还原茚三酮、氨基醛，和此同时，还原茚三酮又和氨基茚三酮缩合生成蓝色化合物而使氨基酸斑点显色。二、试验材料（一）样品1氨基酸标准溶液：（1）0.01mol/L丙氨酸：称取丙氨酸8.9mg溶于90%异丙醇溶液至10ml。 （2）0.01mol/L精氨酸：称取精氨酸17.4mg溶于90%异丙醇溶液至10ml。 （3）0.01mol/L甘氨酸：称取甘氨酸7.5mg溶于90%异丙醇溶液至10ml。2混合氨基酸溶液：将0.01mol/L丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等体积制成混合溶液。
9、（二）试剂 1硅胶G(C.P.)20.5%羧甲基纤维素钠（CMCNa）：取羧甲基纤维素钠5g溶于1000ml蒸馏水中，煮沸，静臵冷却，弃沉淀，取上清备用。3展开溶剂：按80:10:10百分比（V/V）混合正丁醇、冰醋酸及蒸馏水，临用前配制。 40.1%茚三酮溶液：取茚三酮（A.R.）0.1g溶于无水丙酮（A.R.）至100ml。 5展层-显色剂：根据10:1百分比（V/V）混匀展开剂和0.1%茚三酮溶液。（三）仪器及器材1层析板（615cm）； 2小烧杯； 3量筒（10mL）； 4小尺子； 5吹风机； 6毛细玻璃管； 7层析缸； 8烘箱。三、试验步骤（一）试验步骤（二）操作步骤 1制板（1）调
10、浆：称取硅胶3g，加0.5%的羧甲a. 玻璃板要清洁平整，无油污。 基纤维素钠8ml，调成均匀的糊状。b. 粘在玻璃板侧面边上的硅胶（2）涂布：取洁净的干燥玻璃板a均匀涂粉应去掉，不然在层析时会有较层b。强的边缘效应。（3）干燥：将玻璃板水平放臵，室温下c. 应逐步加温，温度过高易造成放臵0.5h，自然凉干。c（4）活化：70烘干60分钟。涂层裂开。2点样（1）标识：用铅笔距底边2cm水平线上a. 用冷风吹干，避免破坏氨基酸。均匀确定4个点并做好标识。每个样品间最好从玻板后面吹。 相距1cm。b. 反复点样时必需等第一点样品（2）点样：用毛细管分别吸收丙氨酸、干后再点第二点。 精氨酸、甘氨酸及
11、混合氨基酸溶液，轻轻接触薄层表面点样。加样原点扩散直径不超出2mm。点样后用电吹风a轻轻吹干，必须时反复加样b。3层析将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-a. 样点不能浸入到溶液中。显色剂液面应低于点样线a。盖好层析缸b. 将层析缸盖涂上凡士林，预防盖b，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶层析液挥发。 端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线。图9-8 薄层层析装臵4显色用热风吹干或在90下烘干30min，即可显出各层斑点。（三）注意事项 1吸附剂薄层层析用的吸附剂如氧化铝和硅胶的颗粒大小通常以经过200目左右筛孔为宜，假如颗粒太大，展开时溶剂推进速度太快，分离效果不好。反之，颗粒
12、太小，展开时太慢，斑点易拖尾，分离效果不好。2点样点样的次数根据样品溶液的浓度而定，样品量太少时，有的成份不易显示，样品量太多时易造成斑点过大，相互交叉或拖尾，不能得到很好的分离，点样后的斑点直径通常为0.2cm。3避免污染整个层析过程中，避免用手接触层析板，必须时戴上手套。四、结果和讨论（一）结果 1层析结果：图9-9 氨基酸薄层层析结果图2数据统计根据下表统计各氨基酸色斑中心至样品原点中心距离（a）及溶剂前缘至样品原点中心距离（b）色斑中心至样品原各斑点点中心距离（a）丙氨酸 甘氨酸 精氨酸 混合点1 混合点2 混合点3平均a值点中心距离（b）溶剂前缘至样品原溶剂前缘至样品原点中心距离（b
13、）3结果计算和统计Rf?原点到层析斑点中心的原点到溶剂前沿的距离距离各斑点Rf值氨基酸名称丙氨酸 甘氨酸 精氨酸 混合点1 混合点2 混合点34常见问题及处理问 题 解析硅胶颗粒太小；层析液因为挥发浓度降低。 茚三酮因存放时间长失效；显色时未用热风吹干，或（1） 斑点拖尾，不集中 （2） 斑点未显色者烤箱温度不足。篇三：氨基酸薄层层析一、试验目标1、了解并掌握薄层层析法的原理。2、掌握氨基酸薄层层析法的正确的操作步骤。3、掌握依据不一样物质的移动速率（Rf值）来判定被分离的混合物的多种组分。 氨基酸薄层层析二、试验原理1.薄层层析原理薄层层析时通常是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。
14、当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，因为吸附剂对不一样氨基酸的吸附力不一样，不一样氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品伴随展开剂的移动速率也不一样，因此能够相互分开。（即经过吸附-解吸-再吸附-再解吸的重复进行，而将样品各组分分离开来）2.氨基酸和茚三酮的显色反应茚三酮水化后生成水化茚三酮，它和氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，和此同时，还原茚三酮又和氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。3.基于相对迁移率Rf值判定混合氨基酸组分薄层层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离和溶液前沿的距离之比为Rf值即：Rf = 原点到层析斑点中心的距离原点到溶剂前沿的距离因为物质在一定溶剂中的分配系数是一定值，故其移动速率（Rf值）也是恒定的，所以能够依据Rf值来判定被分离的物质。三、材料和方法A材料：1样品：（1）0.01mol/L丙氨酸：称取丙氨酸8.9mg溶于90%异丙醇溶液至10mol。（2）0.01mol/L精氨酸：称取精氨酸17.4mg溶于90%异丙醇溶液至10mol。（3）0.01mol/L甘氨酸：称取甘氨酸7.5m
