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1、目录中文摘要（关键词）1外文摘要（关键词）2前言31 材料与方法51.1 材料51.1.1 菌株51.1.2 药物51.1.3 培养基及试剂51.1.4 器材51.2 方法51.2.1 培养基的制备51.2.2 大肠杆菌的扩大培养61.2.3 药敏纸片琼脂扩散试验61.2.4 微量稀释法试验71.2.5 棋盘稀释法测定联合抑菌浓度指数（FIC）82 结果与分析92.1 药敏纸片琼脂扩散试验92.2 微量稀释法试验102.3 FIC指数113 结论与讨论113.1 讨论113.1.1 关于试验113.1.2药敏试验在兽医临床疫病防治中的意义123.1.3 药敏试验的注意事项123.1.4 关于耐
2、药性123.2 结论13参考文献15致 谢16沈阳农业大学学士学位论文摘要细菌耐药性和耐药菌感染是医学界面临的一大难题，目前几乎所有的抗菌药物，均出现了耐药菌株。由于广谱抗菌药的滥用以及细菌间耐药基因的转导等因素，导致耐药菌增多，尤其是大肠杆菌对常用抗菌药物耐药的发展越来越令人担忧。因此，通过纸片扩散法、最小抑菌浓度测定（MIC）和联合用药等体外药物敏感试验,比较罗氧氟沙星、庆大霉素、土霉素、磺胺嘧啶钠和氨苄西林钠对大肠杆菌的体外抑菌效果。目的：了解大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药情况，指导临床合理用药。方法：通过纸片扩散法、最小抑菌浓度测定（MIC）和联合用药等体外药物敏感试验,比较罗氧氟沙星、
3、庆大霉素、土霉素、磺胺嘧啶钠和氨苄西林钠对大肠杆菌的体外抑菌效果。结果：大肠杆菌对氧氟沙星、对庆大霉素和氨苄西林钠敏感；对土霉素耐药；对磺胺嘧啶钠中介。庆大霉素和氧氟沙星联合用药对大肠杆菌呈现协同作用。结论：临床分离的大肠杆菌对常用抗菌药物有耐药性，应根据分离株耐药特点选用不同的治疗方案。关键词：大肠杆菌；药敏试验；MIC；FICAbstractBacterial resistance and bacterial infection after bacterial resistance is a big problem in medicine. At present nearly all ba
4、cterial are becoming,resistance to their original sensitive antibiotics. Drug-resistance bacteria, especially the resistance E. coli, are increasing because of abuse of broad-spectrum antibiotics and transduction of drug resistance gene in bacteria, the drug resistance in E. coli has been caused peo
5、ple much anxiety. For the reason that compare with The Ofloxacin、Gentamicin、Terramycin、Sulfadiazine sodium and Ampicillin sodium in vitro resistance results about E. coli performed by antimicrobial susceptibility test ,Minimal inhibitory concentration (MIC) and FIC with disc agar diffusion methods.O
6、bjective: To investigate the resistance of E. coli to commonly used antimicrobial a-gents,so as to guide the rational antimicrobial application in clinic. Methods: To compare with The Ofloxacin、Gentamicin、Terramycin、Sulfadiazine sodium and Ampicillin sodium in vitro resistance results about E. coli
7、performed by antimicrobial susceptibility test ,Minimal inhibitory concentration (MIC) and FIC with disc agar diffusion methods. Results showed that E. coli was sensitive to Ofloxacin、Gentamicin and Ampicillin sodium； middle to Sulfadiazine sodium；drug sensitive to Terramycin. The result suggested t
8、hat the combination of Ofloxacin and the Gentamicin demonstrate synergic action on the bacteria. Conclusion: E. coli isolated from clinic has multiple resistance to commonly used antimicrobial resistance, different treatment protocols should be chosen according to the drug-resistant characteristics
9、of isolated strains.Keywords: E. coli; Susceptibility test;MIC;FIC前言致病性大肠杆菌是医学和兽医临床感染中常见致病菌之一23。我国不少地区大肠杆菌在腹泻病人的病原谱中占首位1。在兽医临床上大肠杆菌造成的危害也十分严重,如仔猪黄白痢、猪水肿病、禽大肠杆菌病等一直是困扰养殖业发展的常见病、多发病2。大肠杆菌应激综合症的平均发病率为30 %40 %,最高达到80 %,死亡率高达90 %,在我国由大肠杆菌引起畜禽养殖业的经济损失达数十亿元。2006 年在国内发生的猪高热病疫情中,我们从发病猪场分离出致病性大肠杆菌阳性率占调查猪场的27
10、%3。抗生素的应用对控制和预防大肠杆菌所引起的疾病发挥了一定的作用。但随着抗生素的广泛应用,使临床上出现的细菌耐药越来越严重,这已成为世界性问题。严重影响了临床治疗效果给临床治疗带来了很大的困难 4。大肠埃希氏菌( Escherichia coli) 通常简称为大肠杆菌，主要寄居于人和动物的肠道内，该菌在自然界分布广泛，属于条件致病菌5 。大肠杆菌属革兰氏阴性兼性厌氧杆菌，对生长条件要求不高，在普通培养基上即能良好生长，无芽孢，有运动能力，可以发酵乳糖、分解葡萄糖。该菌是温血动物肠道后段常在菌，可引起肠道疾病或肠道外感染6。 大肠杆菌病指部分或全部由大肠杆菌所引起的局部或全身性感染的疾病,包括
11、大肠杆菌性败血症、大肠杆菌性肉芽肿、气囊病、禽蜂窝织炎、肿头综合征、腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、全眼球炎和脐炎。大肠杆菌病在哺乳动物中主要引起肠道疾病,而在禽类中,当宿主防御能力下降时,常引起继发性局部或全身性感染。大肠杆菌病给全世界的养禽业造成巨大的经济损失7。氧氟沙星是新的喹诺酮类抗菌素，是抗菌谱广、活性强的杀菌剂，其作用机理是对细菌DNA旋转酶具有强力抑制作用，且对细胞壁有高度渗透作用，因此抗菌活性极强8。对大多数革兰阳性菌如金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、链球菌等和革兰阴性菌如大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、产气杆菌、变形杆菌、流感杆菌、淋球菌等及支原体、衣原体均具有抗菌活性 9，特别是肠道革
12、兰氏阴性菌具有较好的抗菌作用。土霉素抗菌谱与四环素相似，除对革兰氏阳性菌和阴性菌有作用外、对立克次体、衣原体、支原体、放线菌、螺旋体和某些原虫亦有等亦有抑制作用。在革兰氏阳性菌中，对葡萄球菌、溶血性链球菌、炭疽杆菌、破伤风梭菌和梭状芽孢杆菌等作用较强；在革兰氏阴性菌中，对大肠杆菌、沙门氏菌、布鲁氏菌和巴氏杆菌的较敏感。对伤寒杆菌几乎无效，用于痢疾、斑疹伤寒、沙眼、结膜炎、肺炎、中耳炎、疖疮及皮肤化脓感染等。磺胺嘧啶钠抗菌谱广、性质稳定、价格低廉，对许多革兰氏阳性和阴性菌均具抗菌作用。氨苄西林钠为广谱半合成青霉素，对G+ 及G- 均有广谱杀灭作用, 又对耐青霉素的金黄色葡萄球菌有效。对溶血性链球
13、菌、肺炎链球菌和不产青霉素酶葡萄球菌具有较强抗菌作用,与青霉素相仿或稍逊与青霉素10。庆大霉素是一种广谱氨基糖苷类抗生素，但毒性较大，安全范围窄，对大部分革兰氏阳性和阴性病原菌有效。在阴性菌中，对大肠杆菌、变形杆菌、嗜血杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌和布鲁氏菌等均有较强的作用，特别是对肠道菌及绿脓杆菌有高效。在阳性菌中，对耐药金葡菌的作用最强。对耐药的葡萄球菌、溶血性链球菌、炭疽杆菌等亦有效。近年来，随着临床上应用的抗菌药物的日益增多,特别是许多广谱抗生素及新型抗生素在临床上的广泛应用,使细菌耐药性成为全球关注的焦点。其中肠杆菌属细菌是目前临床感染中最重要的病原菌,对抗生素的耐药性更为显著。细菌的耐
14、药性是普遍存在的,细菌耐药性产生的原因是多方面的,一方面,就细菌本身而言,细菌有显著的适应性和惊人的多变性,除了细菌先天固有的耐药性外,细菌也可以通过接合、转导和转化等方式,由染色体、质粒等介导，产生基因突变,从而使细菌产生获得性耐药。另一方面,就抗生素而言,大量广谱抗生素的广泛应用,特别是第三代头孢菌素的使用,更易筛选出耐药菌株。因此,适当的检测耐药菌株,了解细菌的分布及耐药情况,对防止和延缓细菌耐药性的产生,指导临床医生合理使用抗生素,控制病原菌特别是耐药菌株的播散和流行具有十分重要意义。利用药敏试验来选用抗生素可以指导临床合理用药。药敏试验旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感（或耐受）程
15、度，以指导临床合理选用抗生素药物。其结果一般用敏感、耐药和中介来表示，是提供治疗感染性疾病最有力的依据，也可进行流行病学调查，了解耐药菌株的耐药机制。此外利用药敏谱可对被检菌株进行鉴定。敏感，即被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈，禁忌症除外；耐药，即被测菌株不能被常用剂量所达到的组织内或血液中的抗生素所抑制；中度敏感，表示被测菌株可以通过提高剂量被抑制或在生理性浓集的部位被抑制，抑菌圈落入中介度范围，意义不明确，如果没有其它可以替代的药物，应重复或以稀释法测定MIC。本文通过纸片扩散法、MIC测定和联合药敏等试验，测定氧氟沙星、氨苄西林钠、庆大霉素、土霉素和磺胺嘧啶钠五种药物对大肠杆菌的体外抑菌效果并进行比较，为临床合理用药提供依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株大肠杆菌C81021.1.2 药物氧氟沙星：东北制药集团公司沈阳第一制药厂 100 mg/片庆大霉素：河南辅仁怀庆堂制药有限公司 8万单位/2 ml土霉素：药理实验室提供的原粉磺胺嘧啶钠：河南天方药业股份有限公司 2ml:0.4 g氨苄西林钠：上海新亚药业有限公司 1 g/瓶1.1.3 培养基及试剂营养肉汤：北京奥博星生物技术有限责任公司 规格：250 g
