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1、酶联免疫吸附试验(ELISA)基本原理与结果解释基本原理：一、包被1、固相载体的要求(1) 、结合抗体或抗原的容量大(2) 、抗体或抗原牢固地固定在其表面(3) 、不影响免疫反应性(4) 、利于反应充分进行(5) 、固相方法简便易行，快速经济2、固相载体的材料：聚笨乙烯3、包被 coating将抗原或抗体结合于固相载体。4、封闭 blocking用1%5%的牛血清白蛋白或5%20%小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除 非特异性吸附。二、反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体。标记酶的要求：(1) 、活性高(2) 、性质稳定(3) 、专一性强(4) 、酶催化底物的显色信号易于判断和测量(5
2、) 、方法敏感，重复性好，简单易行(6) 、酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉 常用酶辣根过氧化物酶HRP (ELISA中应用最为广泛的标记用酶)三、洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离。四、底物显色HRPDH2+H2O2 D+2H2OH2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很高。供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多 种。常用底物：四甲基联苯胺TMB四甲基联苯胺TMB是ELISA中应用最广泛的底物o TMB反应后显蓝色，加酸终止反应后 变为黄色，测定波长450nm，稳定，无致癌性常用方法与原理一、双抗体夹心法方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色 应用：二价
3、或二价以上的较大分子抗原测定乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等二、双抗原夹心法原理：类似双抗体夹心法操作步骤：类似双抗体夹心法应用：乙型肝炎表面抗体a Av-lolI洗涤3、加酶标抗体 与抗原结合 洗涤1.已知抗体包被于载体表面2.枷删瑚 原与巒合 洗涤双抗体夹心法测抗原三、竞争法（测抗原）方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。 加底物显色。应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）四、竞争法（测抗体）原理：类似检测抗原的竞争法应用：乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）的检测YYYK已知抗体包 被于
4、载体表面XWW7K已知抗体包 被于载体表面2.加持检瀚 抗原与酶标抗 原竞争与抗体2、弼持测物 和酶标抗原 酶标抗廉与抗 体结合3、加聲作用 的底物不显邑 或显芭弱3、加聲作用的底物不显邑竞争法测抗原3、加酶作用 的底物呈邑五、间接法方法：用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG （抗抗体或二抗）加底物显色。 优点：一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。 应用：常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定。1已贼醐肝轍麺洗涤3加酶标抗Ig 与抗储合 洗涤goa a aAAA 间接法测抗体L已知抗体吸 肝载体表面 2,爲J 球体与頤路合 洗涤3、加酶标的抗Ig六、捕获法方法：
5、抗人IgMu链抗体包被捕获待测标本中IgM类抗体一加入特异性抗原和酶标记特异性 抗原的抗体底物一显色应用：病原体急性感染诊断中的IgM型抗体、甲型肝炎HAV-IgM抗体、乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗体H固相彳匕扶人2*加觀1物 特异性则与 非特异桂则 和抗人严J结合洗涤1 r3、加特卑性 垸原*与特异 性抗体结合 抚涤4*加酶标抗体 与特异牲抗原姑 合，加底物显邑固相化抗人YYY 00們丫YYY2、加持测物 只有非特异性域 和抗人M结合3、加特异性抗 原，不能与非 特异性域结合4、加酶标抗体 无抗原鰭合、 加底物不显色捕获法原理常见乙肝两对半结果解释结果 模式XHBsAg抗HBsHBeAg
6、抗HBe抗HBc-IgM结果解释1阳性+阴性阳性+阴性阳性+俗称三大阳说明患者是慢 性肝炎，有传染性。处于活 动期2阳性+阴性阴性阴性阳性+急性乙肝感染阶段或是慢性乙肝表面抗原携带者，传染性弱些3阳性+阴性阴性阳性+阳性+乙肝已趋向恢复，属于慢性 携带者，传染性弱，长期持 续此状态可转变为肝癌4阴性阳性+阴性阴性阳性+既往感染过乙肝，现仍有免 疫力，属于不典型恢复期。 也可能为急性乙肝感染期5阴性阴性阴性阳性阳性既往有乙肝感染，属于急性+感染恢复期，少数人仍有传 染性6阴性阴性阴性阴性阳性+过去有乙肝感染或现在正 处于急性感染7阴性阳性+阴性阴性阴性以前打过乙肝疫苗或以前 感染过乙肝8阴性阳性+阴性阳性+阳性+急性乙肝恢复期，以前惑染过乙肝9阳性+阴性阴性阴性阴性急性感染早期或者慢性乙 肝表面抗原携带都传染性 弱。10阳性+阴性阴性阳性+阴性慢性乙肝表面抗原携带者 易转阴或者是急性感染趋 向恢复11阳性+阴性阳性+阴性阴性早期乙肝惑染或者慢性携带者，传染性强12阳性+阴性阳性+阳性+阳性+急性乙肝感染趋向恢复。或者为慢性携带者
