植株N测定方法

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1、二、植株全氮的测定(根据师兄经验加以改进的)在农产品质量检测中，蛋白质的测定实际上也是通过对产品中全 N 的测定再 进行换算的，小麦的换算系数为 5左右。该方法测定出的蛋白质不包括氨基酸、 酰胺等非蛋白质N,因此为粗蛋白。该方法测定的N不包括硝态氮(N02tN, N03-1N),因为N03-在消煮 过程中易挥发损失不还原成 NH4+小麦籽粒N含量：2. 2%-2.5%，茎秆为05%。植株的含N量约为03%-5%干物 重。(一) 目的意义1. 诊断作物营养水平，指导施肥。2. 了解施肥效应和肥料利用率。3. 用于农产品及饲料的品质鉴定。(二) 植株全氮的测定(HSO HO消煮，蒸馏法)2 4 2

2、 21、方法原理(1) HS0H0 消煮原理2 4 2 2植物样品在浓HSO溶液中，经过脱水、碳化、氧化等一系列的作用后，易24分解的有机物则分解，然后再加入HO，HO在热的浓HSO溶液中会分解出新2 2 2 2 2 4生态氧，具有强烈的氧化作用，可继续分解没被HSO破坏的有机物，使有机态24 氮全部转化为无机铵盐。同时，样品中的有机磷也转化为无机磷酸盐，故可用同 一消煮液分别测定N、P、K (植株中K以离子态存在)。(2) 蒸馏法原理蒸馏过程的反应：(NH) SO + NaOH Na SO + 2NH + 2H O4 24232NH + HO NH OH3 24NH OH + HBO NH

3、H BO + HO4 334232 滴定过程的反应：NH HBO + HSO (NH) SO + 2H BO423244 24332、主要仪器、试剂(1) 主要仪器：消煮管(用洗衣粉搓洗后，用蒸馏水洗)、螺口瓶、枪头、万 分之一电子天平、电热板或普通电炉、定氮仪等。(2) 需用的试剂：1浓H2SO4（化学纯是指满足一般生产或分析试验的试剂纯度，分析纯的纯度要比化24学纯要高，一般应用于要求比较苛刻的场所，化学纯、分析纯、色谱纯,是指试剂的纯度级别,化学纯是指一般化学试验用的，有较少的杂质，不妨您的实验要求。分析纯是指做分析测定用的试剂，杂质更少，不妨碍分析测定。色谱纯是指进行色谱分析时使用的标

4、准试剂， 在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。）因此试验课本上要求用化学纯，试 验室提供分析纯也不影响。2 30%HO 。223 10mol L-i NaOH溶液：400g氢氧化钠溶于水，冷却后稀释到1升。（直接用2 升的量筒配就可以了，要求不是很精确，配好后用塑料瓶封装）4甲基红一溴甲酚绿混合指示剂：0.099g溴甲酚绿和0.066g甲基红（比较难溶，先 磨细再溶解）溶于100ml乙醇中（为95%的乙醇，如果是100%的，直就吸95ml乙醇加5ml 水配）（一次配个500ml，冰柜保存，可长期保存）5 20gL-i硼酸一指示剂溶液：将20g硼酸于950ml的热蒸馏水中，冷后， 加

5、入20ml的混合指示剂，充分混匀后，小心滴加氢氧化钠（c=0.1mol/l （差不 多浓度的NAOH来调整就可以了），直至溶液呈紫红色（pH约为4.5），稀释成1 升（该指示剂一次可以配个2L,然后冰柜保存，可以用3天左右）6 标准盐酸的配制：粒子、叶中含氮量较高，配标准盐酸溶液时，可以考虑配置0.1mol.l-1HCL，其中0.05 mol.l-1HCL的配置方法为：2L水中溶解84ml 浓盐酸。则 0.1 mol.l-1HCL、0.2 mol.l-1HCL 配置方法参照上面，分别为： 2L 水 中溶解16.8ml浓盐酸、2L水中溶解33.6ml浓盐酸。8 0.02 mol/l 碳酸钠的配制

6、称取已烘干的无水碳酸钠21.198g溶于解于1000ml的容量瓶中。9 标准盐酸的标定：吸取5 ml 3份0. 02 mol/l的碳酸钠分别放入三角瓶中，加1-2滴溴甲酚绿-甲基红棍合 指示剂，用配好的0.1N酸溶液滴定至溶液由绿色变为紫红色，煮沸2-3分钟逐尽C02，冷 却后继续滴定至溶液突变为葡萄酒红为终点，计算求得盐酸溶液的浓度。3、测定步骤（ 1 ）待测液的制备称磨细烘干的植物样品（0.250.5mm筛）03000g，置于消煮管，用少量水 湿润样品（3-5ml）,加浓硫酸5ml，摇匀（最好放置过夜），在电炉上先缓缓加 热（250v，30min），待浓硫酸分解冒白烟时逐渐升高温度（380

7、V、1h），消煮至 溶液呈均匀棕黑色时，（200V）稍冷后滴加HO至溶液变成乳白色，并不断摇动22三角瓶。再加热（380v） 30min，直至消煮液呈无色或清亮色后。消煮液置于蒸馏管，并用少量水洗涤，每次3-5ml,总用量不超过20ml, 加入40mlNAOH溶液（用3个小烧杯放置在旁边，差不多40ml就可以了），在螺 口瓶中加20g L-1硼酸一指示剂溶液，将螺口瓶置于定氮仪冷凝管末端，管口离 硼酸液面以上34cm处，待馏出液体积约60ml时，蒸馏完毕。（蒸馏过程中：1. 首先可以自己先烧热水导入蒸馏瓶中，也可以打开蒸馏瓶出口，用电压进行烧 煮，加样及NA0H时，1先把电压关了，然后蒸馏口的

8、夹子关了 2打开加样口， 将样品用蒸馏水洗入其中，记住加入NAOH，用蒸馏水冲洗一下（这里不要关了 加样口，暂不关）3 打开蒸馏瓶口，打开电压，然后再关闭加样口）4 拿螺口 瓶接着 5 最后统一滴定。（每一个样品接受完，关掉电源，关掉蒸馏口、然后迅 速将水放入出口，则通过倒吸，就洗干净，要放掉倒吸的水时，把加样口也打 开，这样水放得快）。（三个蒸馏电压分别为 40V、45V、52V）滴定指示剂 7-10 滴左右，然后终点为酒红色。4、结果计算植株中 N （%） = （V-V ）XcX14X tsX10-3 X 100/m10式中：V 样品测定所消耗标准酸ml数；1V 空白试验所消耗标准酸ml数

9、；0c标准酸（H+1）的浓度molL-1；14 氮原子的摩尔质量（gmol）；10-3 ml 换算为 L；ts 分取倍数；（定容体积/吸取液体体积）m 干样品质量（g）。100换算成百分数5、注意事项（1）消煮开始时火要小；（2）加HO时要等器皿少冷后，提起小漏斗，直接将HO滴入溶液中；2 2 2 2（3）消煮要彻底。消煮好的标志是：溶液呈无色或清亮色；（4）消煮液最后要赶尽HO。否则会影响氮、磷的比色测定。方法是消煮液呈22清亮色后再煮5-10分。也可观察液面的波动，赶尽HO后液面比较平静；22（4） 碱液要过量。要求中和完硫酸后再过量 2ml；（ 5） 蒸馏装置不能漏气；（6）硼酸要足量。

10、估算方法：按lml浓度为lO.OgL-1的硼酸能吸收0.46mg的 N 计算；7） 指示剂和硼酸最好分开配置保存。因二者混合过久，有指示终点不明显的 可能。（8）指示剂和硼酸的pH要调到4.5（变色点）。9）空白每 46 个做2个空白。空白不加植株样10）两次平行结果误差允许 0.005%。（三）植株全磷的测定（HSO HO消煮，钼锑抗比色法）2 4 2 21、方法原理 钼锑抗比色法的原理即在酸性条件下，正磷酸根能与钼酸铵发生反应，形成 钼杂多酸络合物，在锑剂存在下，用抗坏血酸将其还原成蓝色的络合物。溶液蓝 稳定，蓝色的深浅与磷的含量成正相关，所以，可用比色法测定溶液中磷的含量。2、主要仪器、

11、试剂（1）主要仪器：50ml容量瓶；722或723型分光光度比色计等。（ 2）试剂钼锑贮存液：浓硫酸（H SO 153ml缓慢倒入约400ml蒸馏水中，同时搅拌。24纺织冷却。另称10g钼酸铵溶于约60C的300ml蒸馏水中，冷却。将配好的硫 酸溶液缓缓倒入钼酸溶液中，同时搅拌。随后加入酒石酸锑钾（p =5g/l）溶液 100ml,最后用蒸馏水稀释至1000ml，避光保存。钼锑抗显色剂：1.50g抗坏血酸加入到100ml钼锑贮存业中。有效期为一天。6mol L-1 NaOH 溶液。2， 4二硝基酚指示剂： 0.2g2， 4二硝基酚溶于 100ml 的水。P标准贮存溶液：0.4390g磷酸二氢钾

12、（105C烘2小时）溶于200ml蒸馏水 中，加入5ml浓硫酸，装入1升的容量瓶中，用水定容。其p =100mg/l，可长期 保存。P标准溶液：取磷标准贮存液准确稀释20倍，即为磷标准溶液（p =5mg/l）, 不宜久存。3、测定步骤吸取消煮好的待测液（同全氮测定）10ml，分别置于50容量瓶中，加2, 6 二硝基酚指示剂2滴，用6molL-1NaOH调pH至刚显黄色，加钒钼酸铵试剂 10ml，用水定容。摇匀，放置5min，用分光光度计在450nm处比色。以空白液 调节仪器零点。标准曲线制作：分别吸取50ug ml-1的P标准溶液0、1.0、2.5、5、7.5、 10.0、15.0ml，于50

13、ml容量瓶中，同上述操作步骤显色和比色。该标准系列P 的浓度分别为 0、1.0、2.5、5、7.5、10.0、15.0 ug ml-1。4、结果计算植株全P(%)=Pvx分取倍数X10-4 /m式中：p 从标准曲线查得显色液P的质量浓度(ug/ml)V 显色液体积(ml)m 干土样质量(g)5、注意事项显色液的酸度要求在0.041.6mol.L-i, H+内，酸度过高时，显色不完全或不显色，酸度太低时则可能生成沉淀或其它物质的颜色；比色要在15min后24h内完成。(四)植株全钾的测定(HSO HO消煮，火焰光度法)242 21、方法原理即增加盐基成分，促进硅酸盐分解，使难溶的硅酸 盐分解成可

14、溶性化合物， 从而使矿物态钾转化为可溶 性钾，用酸溶解稀释后即可用火焰光度计测定。因为，硅酸盐矿物含酸性成分较多，所以，土壤硅酸盐的溶解度决定于硅和 金属元素的比例，以及金属元素的碱度。硅与金属元素的比值愈小、金属元素的 碱性愈强，硅酸盐的溶解度也愈大。2、主要仪器、试剂(1) 主要仪器： 50ml 容量瓶；火焰光度计。(2) 试剂：100mgL-iK标准溶液。3 、测定步骤吸取消煮好的待测液(同全氮测定)510ml，置于50容量瓶，水定容，摇 匀，火焰光度计测定。标准曲线制作：分别吸取100ug ml-1的K标准溶液1、2.5、5、10、20、 30ml，分别于50ml容量瓶中，加与吸取的待测液等量的空白消煮液，水水定容。 该标准系列K的浓度分别为0、2、5、10、20、40、60ugml-1。4、结果计算植株全钾(%)=pV X分取倍数X 10-4 /m式中：p 从标准曲线查得显色液K的质量浓度(ugml-1)V 测定液体积(ml)m 干土样质量( g)5、注意事项按要求制作标准曲线；标准溶液和待测液的组成要基本相同。因为，溶液组成的改变（包括酸碱、阴、阳离子的浓度）对测定结果有影响； 仪器状态（如空气压力、火焰的状态等）对测定结果有影响