流式细胞仪使用程序1. 目的 规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作2. 适用范围 适用于本实验室使用流式细胞仪3. 职责 操作人员应熟练掌握并自觉遵守本标准操作程序如需获得更多信息，请参 阅该仪器用户手册4. 支持性文件 流式细胞仪使用说明书5. 操作规程5.1 仪器开/关机程序5.1.1 开机程序5.1.1.1 检查仪器鞘液桶和废液桶5.1.1.2 打开流式细胞仪5.1.1.3 气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡5.1.1.4 打开电脑5.1.1.5 等待机器预热 5—10 分钟后可开始实验5.1.2 关机程序5.1.2.1用4mll0%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml5.1.2.2将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml5.1.2.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步5.1.2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上5.1.2.5选择Standby模式10分钟5.1.2.6 关闭电脑，再关掉仪器5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序）5.2.1CaliBRITE Beads 的准备5.2.1.1在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITE Beads，并标昆明医科大学 第二附属医院 中心实验室 作业指导书流式细胞仪使用程序文件编号：LAB-SOP-001 生效日期：2013年 月 日 页码：第2页共页上 unlabeled ；若配有双激光做四色，则须在 unlabeled 管中再加一滴 APC-beads ；5.2.1.2 在另一装有 3ml 鞘液的 FALCON 管加入 unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、 和APC-beads （若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed （PerCP不很稳 定，最好在上机前加入）；5.2.1.3 避光放置，准备上机。
5.2.2 软件环境的设置5.2.2.1从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；5.2.2.2在Sign In视窗中填入下列信息：操作者、机构、实验室主任（操作者 是必须填入的，计算机将保存这些信息），点击 Accept；5.2.2.3 进入 Set Up 视窗，在 Assay Selection 中，选择你需要的 Assay： Lyse/Wash、Lyse/No Wash 或 HLA-B27 Calib；在 CaliBRITE Beads Lot Ids中， 根据每一种beads所对应的编码输入Lot ID；在Automatic Saving Options中， 你可以选择自动保存或不保存Summary Report，你可以通过单击Location来更 改文件名以及保存的位置；最后在 Set Up 视窗的右下角点击 Run5.2.3Beads 的检测5.2.3.1将功能键放在RUN的位置，流速设成HI,将混匀的标有unlabeled的 试管放在支撑架上，点击Start，开始调节PMT，如软件在unlabeled试管中测 到APC-beads，则在PMT调节完后，马上进行时间延迟的调校；如果调试成功， 会出现“Time Delay Calibration was successful"，然后直接进入补偿视窗； 如果调试不成功，你有5秒钟的时间决定是再试一次，还是重复开始的PMT调节， 或是继续到下一步调节补偿；若你在 5 秒内还没有决定，软件自动进到补偿的视 窗。
如果你在时间调校失败的基础上继续补偿的调节，那么你所得到的 FL3-%FL4 和 FL4-%FL3 的值会有较大的变化；5.2.3.2在支撑架上换成混匀的标有mixed试管，点击St ar t，开始调节补偿， 补偿调试成功后，FACSComp自动进行灵敏度调试，点击Start，开始调试灵敏度； 调试完成后，软件计算结果，并将所有的结果都保存于 Calib File 或 Calib File.LNW 中，同时给出 Summary Report；昆明医科大学 第二附属医院 中心实验室 作业指导书流式细胞仪使用程序文件编号：LAB-SOP-001 生效日期：2013年 月 日 页码：第3页共页5.2.3.3 从支撑架上移走装有 beads 的试管，换上蒸馏水，并将功能键换成 STAND BY5.3 仪器操作程序5.3.1 抗体标记5.3.1.1 取 FALCON 管加对应荧光抗体，再加标本，涡漩振荡数秒；5.3.1.2 避光室温放置 20 分钟；5.3.1.3加IX溶血素2ml,涡旋振荡数秒；5.3.1.4 避光室温放置15分钟；5.3.1.5 离心， 1000 rpmX5 分钟、室温；5.3.1.6弃上清后加2 ml PBS，涡旋振荡数秒；5.3.1.7 离心， 1000 rpmX5 分钟、室温；5.3.1.8弃上清后加0.5ml PBS，准备上机。
以上为全血标本，如是细胞培养液则无需加溶血素，直接1.6-1.8操作；如是全 血不洗标本则加定量的溶血素，避光室温放置15分钟后，直接上机5.3.2 流式细胞仪分析5.3.2.1 从苹果菜单进入，选择操作软件；5.3.2.2顺序输入样本姓名，点击Run Tests,得到分析结果6. 日常维护和保养6.1 每日保养6.1.1用4mll0%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml6.1.2将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml6.1.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步6.1.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上6.1.5选择Standby模式10分钟6.1.6 关闭电脑，再关掉仪器6.2 每月保养6.2.1 将10%漂白剂装入鞘液桶昆明医科大学 第二附属医院 中心实验室 作业指导书流式细胞仪使用程序文件编号：LAB-S0P-001 生效日期：2013年 月 日 页码：第4页共页6.2.2 旁路鞘液过滤器,以防损害6.2.3将盛有3mll0%漂白剂的试管置于样品支架上，以HI RUN 20-30分钟6.2.4 将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤2. 3。