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1、毕业论文不同亲本数目的中间球海胆群体遗传结构分析学 生 姓 名： 指导教师： 专业名称： 所在学院： 2010年6月目 录摘 要. IAbstract. II第一章 前 言. 1第二章 材料与方法. 32.1 实验材料. 32.2 实验方法. 32.2.1 DNA提取. 32.2.2 PCR扩增. 32.3 数据统计与分析.5第三章 实验结果. 63.1 微卫星扩增位点分析.63.2 各位点等位基因情况.73.3 遗传多样性分析.9第四章 讨 论. 104.1 海胆幼虫DNA提取方法的优势.104.2 海胆遗传学研究现状. 10致 谢.12参考文献. 13大连海洋大学本科毕业论文 摘 要摘 要
2、本实验利用10对微卫星引物，对由不同亲本数目所产生的中间球海胆（Strongylocentrotus intermedius）群体进行了遗传结构分析。实验所用的两个海胆群体分别来源于7个（命名为P7）和3个亲本(命名为P3)，P7群体取100只个体，P3群体取样50只。所有海胆稚胆期采用直接裂解法提取基因组DNA，裂解液直接进行微卫星扩增。结果表明：P3群体扩增出24个等位基因，平均有效等位基因数为1.99750.4209，平均香浓氏指数为0.74210.1984，平均奈氏杂合度为0.47960.1070，P7群体扩增出24个等位基因，平均有效等位基因数为1.97680.5733，平均香浓氏指
3、数为0.72280.2669，平均奈氏杂合度为0.45430.1565；所有遗传学指标在两个群体间没有显著差异。该研究首次建立了中间球海胆稚胆的固定、DNA提取方法并对结果进行了PCR扩增验证，研究结果丰富了中间球海胆分子遗传学内容。关键词：中间球海胆，亲本数目，遗传学，微卫星II大连海洋大学本科毕业论文 AbstractAbstract10 pairs of microsatellite primers were used to analyze the genetic structure of the two Strongylocentrotus intermedius population
4、s which were produced by different parental numbers. 100 individuals derived from 7 parents (named P7) and 50 from 3 parents (named P3) were subjected to microsatellite analysis. DNA of juvenile urchins was isolated from direct lysis and the lysis buffer were directly amplified. Results showed that:
5、 24 alleles in total were detected in P3 population, the means of effective number of alleles, Shannons index and Neis expected heterozygosis were 1.99750.4209, 0.74210.1984 and 0.47960.1070. 24 alleles were detected in P7 population, the means of effective number of alleles, Shannons index and Neis
6、 expected heterozygosis were 1.97680.5733, 0.72280.2669 and 0.45430.1565. All of the genetic indexes between the two groups were not significantly different. This research was the first try of tissue fixation, DNA isolation and PCR amplification of juvenile sea urchin, and the results enriched the c
7、ontent of molecular genetics of sea urchin.Key words: Strongylocentrotus intermedius, parental stock size, genetics, microsatellitesII大连水产学院本科毕业论文 前 言第一章 前 言微卫星标记（microsatellite），又称为短串联重复序列(simple tandem repeats,STRs)或简单重复序列（simple sequence repeats），是均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由1-6个核苷酸的串联重复片段构成，其长度大多在100b
8、p 以内。微卫星标记是20世纪80年代发展起来的一种能有效区别不同物种、不同群体及不同基因型个体的分子标记技术。具有数量多、在基因组中分布广泛、多态性丰富、突变率高、呈孟德尔式共显性遗传、可以特异性的 PCR扩增、稳定性重复性好、引物通用性好、检测快速方便、能较好地反映物种的遗传结构和遗传多样性变化等优点，在研究物种遗传多样性分析、种群遗传结构分析、种质资源鉴定、基因组作图和辅助育种等方面表现的优越,为水生动物的理论基础研究提供了新的手段。微卫星作为多态 DNA 标记在海洋动物的遗传图谱构建、遗传连锁分析、物种遗传多样性的鉴定、种质鉴定等方面已得到广泛应用。斑马鱼作为脊椎动物发育生物学的模式动
9、物,已经构建了以微卫星为主的遗传连锁图谱;李琪等1采用磁珠杂交选择和 PCR筛选法,从长牡蛎DNA选择片段文库中 ,快速分离含有微卫星序列的阳性克隆。在筛选的200个白色菌落中,56个克隆含有重复次数5以上的微卫星序列 ,还获得两个小卫星克隆;徐鹏等2还以菌液为模板筛选到中国对虾31个微卫星DNA。Naish等3在鲤科鱼类中分离出5个4碱基微卫星位点,且对野生型和家养型扩增出了多态性。尹绍武等4对海南近海点带石斑鱼野生和养殖群体微卫星多态分析,总体上来看,点带石斑鱼野生群体的等位基因数、平均有效等位基因数、多态位点比例等于养殖群体,而杂合度两个群体相当,说明海南近海点带石斑鱼野生与养殖群体的种
10、质资源都较好,为保护海南近海点带石斑鱼的种质资源提供了分子水平的依据。谭杰等5运用微卫星DNA技术对仿刺参烟台群体、威海群体大连群体的3个野生群各20个个体进行了遗传分析,结果表明威海群体和大连群体之间亲缘关系较近,烟台群体与前两群体亲缘关系较远。杜博等6对皱纹盘鲍和盘鲍南方养殖群体遗传变异的微卫星分析,发现皱纹盘鲍和盘鲍南方养殖群体遗传多样性较高,有利于遗传选育,但与野生群体相比等位基因有所丧失。海胆是一类比较常见的海洋无脊椎动物，其性腺营养丰富，并含有较多的不饱和脂肪酸，具有很高的医疗保健作用，世界上许多地方都有食用海胆的传统。海胆市场价格很高 ,消费量却非常大。为满足人们对海胆的需求 ,
11、世界许多国家如日本、法国、爱尔兰、智利 ,及美国东北部、加拿大的沿海各省以及从北美西海岸的加利福尼亚州到英国的哥伦比亚都进行了过量捕捞7-8,从而 ,人们对海胆养殖的兴趣不断增加 ,海胆的人工养殖和苗种生产的研究逐渐开展起来7,9-11。在海胆养殖及杂交育种等方面，王丽梅等12-13进行了中间球海胆与光棘球海胆的杂交的研究。常亚青等14用中国北部沿海马粪海胆、海刺猬、光棘球海胆三种主要海胆与引自日本的中间球海胆四种海胆之间的不同组合的杂交试验及其子代浮游幼体及幼海胆的早期生长发育。结果表明，采用生殖调控可使不同海胆达到同步繁殖，在8-24下各种海胆杂交组合的受精率与亲本亲缘关系有关，同时受到双亲繁殖适宜温度的影响,受精率介于0-69.6%之间。王吉桥等15于2005年5 - 10月曾进行了不同密度虾夷马粪海胆与仿刺参投饵混养的试验 ,发现在静水精养下混养时海胆的特定生长率(SGR) 和成活率比单养高 ,水质稳定 ,适宜密度为每立方米 44614 g。目前国内、外对海胆形态学、生物化学以及遗传学的研究都有报道16-18，但有关分子标记技术在海胆研究上的应用的相关报道相比较少。Addison 等19 利用4个微卫星标记分析了从大西洋北部至太平洋东北部11个取样地点的绿海胆的遗传结构。 常亚青等20曾利用 RAPD 技术对5种经济海胆基因组多态性进行了分析。丁君等21采用磁珠富
