胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法概述 - 医学检验

胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法概述 - 医学检验 胆碱酯酶参考办法办法学米氏方程底物浓度RSM 前 言 胆碱酯酶〔cholinesterase〕是催化酰基胆碱水解的一类酶，根据底物及分布部位等特性可将胆碱酯酶分为两大类，一类为乙酰胆碱乙酰水解酶〔acetylcholineacetylhydrolase，EC3.1.1.7〕，又称乙酰胆碱酯酶、真性胆碱酯酶、红细胞胆碱酯酶、胆碱酯酶Ⅰ，主要分布于红细胞外表及神经突触处；另一类为酰基胆碱酰基水解酶〔acylcholine acylhydrolase,CHE,EC3.1.1.8〕，又称丁酰胆碱酯酶、假性胆碱酯酶、血清胆碱酯酶、胆碱酯酶Ⅱ，主要分布于肝脏、胰脏、心脏、脑白质、血清中[1]血清中 CHE 由肝脏合成胆碱酯酶催化活性被广泛用作肝脏合成功能的诊断指标当发生有机磷农药中毒及氨基甲酸酯类中毒时，有机磷酸酯及氨基甲酸酯能迅速与胆碱酯酶结合并抑制其催化功能，致使神经接头与突触处的神经递质乙酰胆碱积聚增多，产生毒性效应[2]虽两种胆碱酯酶在有机磷酸酯和氨基甲酸酯中毒时均受抑制，但 CHE 的灵敏性远高于乙酰胆碱酯酶，在中毒数小时内便可引起血清 CHE 催化活性急速下降[3]。

因此临床实验室均以血清 CHE 催化活性浓度作为诊断肝脏疾病及有机磷农药中毒的敏感指标[4-7]胆碱酯酶催化活性浓度的测量对多种疾病的诊断、风险评估[8、9]、病情及恢复进展的判定具有重要的临床意义胆碱酯酶催化活性浓度测量参考办法亦指 CHE 催化活性浓度测量参考办法由于各国临床化学协会及学术组织的观点不同，血清 CHE 测量办法存在很大差别，临床实验室间检测结果不足可比性，直接导致有限医疗资源的浪费[10]二十世纪研究证明，酶学测定规范化是解决酶学测量结果准确可比的重要途径酶学测量规范化的工作核心为酶学参考系统的建立及应用参考系统由参考办法、参考实验室、参考物质组成截至 2022 年底，国际临床化学联合会〔International Federation of ClinicalChemistry and Laboratory Medicine,IFCC〕已颁布 ALT 等 7 种血清酶测量参考办法，不包含血清 CHE 参考测量办法，说明国际尚无公认的 CHE 测量参考办法[11]基于血清 CHE 测量对医学诊断的重要价值，2022 年 5 月 IFCC 会议曾讨论建立血清 CHE测量参考办法的议案，可见国外已经开始重视对血清 CHE 测量参考办法的建立工作。

…… 1 材料 1.1 实验材料1.1.1 样本收集 2022 年 12 月～2022 年 3 月于北京航天总医院就诊患者单份血清样本，根据检验报告比对及肉眼察看的办法剔除乳糜、溶血及黄疸血清样本，避光冻存于-70℃，根据实验所需样本浓度混匀单份血清后使用 …… 2 办法 2.1 CHE 测量参考办法建立的技术路线 CHE 测量候选参考办法建立的技术路线见图 1： 图 1 CHE 测量参考办法建立的技术路线 2.2 实验办法2.2.1 胆碱酯酶测量参考办法被测量的选择收集近 20 年国内外 CHE 测量办法，其主要为测量酶蛋白质量的质量法及测量酶催化活性浓度的酶催化活性法已有资料说明[24-25]，测量酶蛋白质量的免疫分析法测量速度慢、测量过程复杂，不利于自动化、规范化困难且试剂本钱较高，不利于 CHE测量办法的推广由于一定量的生物基质中仅含有极微量的酶，所以目前各医学实验室通常采用酶催化活性浓度法测量 CHE, 以酶催化活性浓度报告酶的测量结果酶催化活性浓度的单位“katal〞早在 1875 年的“计量公约〞下被国际度量衡总会通过[26]，成为国际认可的酶催化活性浓度计量单位，这使以酶催化活性浓度为单位报告检测结果的实验室间具有一定程度的可比性，有利于酶学测量规范化。

因此，本研究选择“酶催化活性浓度〞为 CHE 参考办法的被测量 3结果 ……32 4 讨 论临床酶学规范化是目前解决临床酶催化活性测定结果在实验室间、各测量办法间不足可比性、互换性以及正常人参考范围混乱的有效途径自上世纪 70 年代起，IFCC便颁布了 GGT、ALT、AST 等酶的催化活性浓度测量参考办法，但至今仍无公认的CHE 催化活性浓度测量参考办法[37]由于各学术组织及各国临床化学协会观点不同，以及办法学研究实验的结果差别等原因，造成 CHE 催化活性浓度测量办法繁多和参考范围混乱的局面因此本研究收集近 20 年来 CHE 测量办法文献，分析不同被测量的测量办法，根据其测量办法规范化、自动化的可行性、试剂来源与本钱等条件，筛选适合作为测量 CHE 的被测量，并针对筛选的被测量分析其应用最为广泛的几种CHE 测量办法，根据胆碱酯酶测量办法的优越性、测量办法的市场占有率、各测量办法的试剂来源及本钱等因素，筛选 CHE 测量参考办法的候选测量原理，并购置相应原理试剂盒进行精密度与线性性能评价，以其中性能良好的检测系统的测量原理为CHE 测量参考办法的测量原理根据对酶学测量的根底理论、酶学测量参考办法的研究现状、胆碱酯酶催化活性浓度测量的原理和特点的理论研究及单因素实验办法选择 CHE 测量参考办法的测量因素及试剂因素的测量条件，尝试以 RSM 对 CHE 测量办法的关键影响因素进行优化，最终建立 CHE 测量参考办法。

5 结 论成功建立了胆碱酯酶催化活性浓度测量参考办法，并建立了单因素联合响应面分析法的酶催化活性浓度测量办法的研究路径 参考文献〔略〕 。