教案（四） 开课单位：化学及环境科学系 课程名称： 分析化学实验 专业年级：2006 级化学专业 任课教师： 分析化学课程组 教材名称： 分析化学实验2008-2009 学年第 1 学期授课 内容实验三 分子荧光法测定罗丹明B的含量 课时安排 4学时教学 目的 要求1•掌握荧光法测定罗丹明B含量的基本原理2.了解F-4500型分子荧光分光光度计的基本构造和原理，并能简单的操作教学 重点 难点教学 方法 手段教 学 内 容 提 纲课外 学习 要求预习下一实验教学 后记实验三分子荧光法测定罗丹明B的含量一、实验原理罗丹明 B 在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与罗丹明 B 浓度呈正比：If=kc基此，测定一系列已知浓度的罗丹明B的荧光强度，然后以荧光强度对罗 丹明B浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B的荧光强度，把它代入标准 曲线方程求出其浓度图1罗丹明B的分子结构二、仪器与试剂1．仪器F-4500型分子荧光分光光度计；1000 mL容量瓶2只，100 mL的容量瓶12 支， 1 mL 的吸量管 1 支2．试剂（1）1x10-2g・L-1的罗丹明B储备液：准确称取1.0000 g罗丹明B,加用二 次蒸馏水定容至100 mL，将此溶液稀释100倍就得到10-4 g.L-1的罗丹明B标准 溶液。
三、实验步骤1 •系列标准溶液的配制 取11只100 mL的容量瓶分别加入10-2 g.L-1的罗 丹明 B 储备液0， 0.10， 0.20， 0.30， 0.40， 0.50， 0.60， 0.70， 0.80， 0.90， 1.00 mL， 用蒸馏水稀释至刻度，摇匀2．绘制激发光谱和发射光谱 在 300~600 nm 范围内扫描激发光谱；在400~700 nm 范围内扫描荧光发射光谱3. 绘制标准曲线 将激发波长固定在556 nm,荧光发射波长固定在573 nm 处，测定系列标准溶液的荧光发射强度4. 未知试样的测定 准确移取一定量1x10-2 g・L-i的罗丹明B标准溶液于100 mL 的容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，配制成未知样品在标准系列溶液同样 条件下，测定未知样品的荧光发射强度5. 绘制荧光强度与对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算 未知试样的浓度四、数据处理1.原始数据浓度(10-4 pg・mL-1)0123456789x荧光强度扣除空白2.标准曲线绘制和未知样品含量计算五、注意事项1. 罗丹明 B 的浓度不要太高2. 实验结束后，检查仪器是否正常，关闭是否正确六、思考题：1•为什么罗丹明B会发荧光？2. 荧光分光光度计有哪些部件组成？3. 如何绘制激发光谱和荧光光谱？4•哪些因素可能会对罗丹明B荧光产生影响？。