精心整理石斛质量标准正文】石斛ShihuCaulisDendrobi本品为兰科植物金钗石斛DendrobiumnobileLindl.铁皮石斛DendrobiumcandidumWall.exLindl.或马鞭石斛 Dendrobiumfimbriatum “铁皮枫斗 （耳环石斛）”【性状】鲜石斛呈圆柱形或扁圆柱形，长约30cm，直径0.4一1.2cm表面黄绿色，光滑或有 纵纹，节明显，色较深，节上有膜质叶稍肉质，多汗，易折断气微，味微苦而 回甜，嚼之有黏性金钗石斛呈扁圆柱形，长20—40cm，直径0.4一0.6cm，节间长2.5一3cm表面金黄 色或黄中带绿色，有深纵沟质硬而脆，断面较平坦铁皮枫斗呈螺旋形或弹簧状，一般为2—4个旋纹，茎拉直后长3.5—8cm,直径0.2— 0.3cm表面黄绿色，有细纵皱纹，一端可见茎基部留下的短须根质坚实，易折断， 断面平坦嚼之有黏性马鞭石斛呈长圆锥形，长40—120cm,直径0.5—0.8cm,节间长3一4.5cm表面黄 色至暗黄色，有深纵槽质疏松，断面呈纤维性鉴别】横切面：金钗石斛表皮细胞 1 列,扁平,外被鲜黄色角质层基本组织细胞大小较 悬殊,有壁孔,散在多数外韧型维管束,排成 7~8 圈。
维管束外侧纤维束新月形或精心整理半圆形，其外侧薄壁细胞有的含类圆形硅质块，木质部有1~3 个导管直径较大含 草酸钙针晶细胞多见于维管束旁铁皮枫斗表皮细胞外壁及侧壁稍增厚、微木化维管束略排成4~5 圈，外侧小型 薄壁细胞种有的含硅质块含草酸钙针晶束细胞多见于近表皮处马鞭石斛表皮细胞扁圆形，外壁及侧壁增厚，木化，有层纹基本组织细胞大小 相近，有壁孔，维管束略排成 3~4 圈检查】水分照水分测定法测定，不超过6.0%总灰分不超过6.0%灰屑不超过3.0%败片率不超过1.0%破碎率不超过3.0%【含量测定】按照高效液相色谱法测定色谱条件：色谱柱为KromasilRKR100-5C18(250mmx4.6mm,5 “ m)；流动相为乙腈 (A)-0.4%磷酸溶液(B)进行线性梯度洗脱，0~5min3%A~10%A,5~l2minl0%A~15%A,12~25minl5%A~22%A,25~40min22%A~35%A,4 0~50min35%A~55%A,50~60min55%A~60%A;体积流量：1.0mL/min;检测波长 270nm;柱温 30U ；运行时间为60min对照品溶液的制备精密称取石斛碱对照品15.45mg,置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀 释至刻度，摇匀，得石斛碱对照品母液。
精密量取1mL，置25mL量瓶中，加甲醇至 刻度，摇匀，作为对照品溶液，备用(对照品溶液质量浓度：123.6mg・L-l) 对照液的制备精心整理对照品溶液的制备取 DextranT 系列标准分子量葡聚糖用蒸馏水配成适当浓度的溶液 过微孔滤膜，即得标准溶液供试品溶液的制备取铁皮石斛药材,50°C干燥4h,粉碎,过60目筛取药材粉末lg, 精密称定，置于索氏提取器中，加甲醇50mL水浴回流4h,提取液挥去部分溶剂，冷却， 加甲醇定容至10mL,用0.45 “ m微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液 测定法取标准溶液通过 HPLC 进行测定，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘 制标准曲本品按干燥品计算，含多糖的量不得少于11.48%炮制】干品除去残根，洗净，切段，干燥鲜品细净，切断性味与归经】甘，微寒归胃、肾经功能与主治】益胃生津，滋阴清热用于阴伤津亏，□干烦渴，食少干呕，病后 虚热，目暗不明用法与用量】6一12g,鲜品15一30g入复方宜先煎，单用可久煎贮藏】干品置通风干燥处，防潮；鲜品置阴凉潮湿处，防冻石斛质量标准起草说明】（一）概述石斛收载于《中国药典》（05年版），原标准中无定量方法，对铁皮石斛药材的质量 控制仍停留在简单的性状鉴别[1],这远远不能实现对铁皮石斛药材进行全面的质量 控制根据药典会有关文件的要求，对该品种质量标准进行提高。
据文献报道，国际上传 统药用石斛以金钗石斛为主，但近年来研究结果发现铁皮石斛的总多糖、水溶性多 糖含量在三种石斛属植物中是最高的铁皮石斛主要有效成份是石斛多糖和石斛碱， 铁皮石解多糖由D —木糖、L —阿拉伯糖和-D葡萄糖组成研究表明，多糖成分与 精心整理 铁皮石斛的药效，如增强肌体免疫机能、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、降血糖等方面， 有着密切的联系故采用石斛多糖作为铁皮石斛含量测定的指标二）质量标准起草说明1、来源 石斛属植物是我国重要的传统中药材，药用价值历代为人们所推崇而铁皮石斛为 石斛之上品，因其特殊的生存环境和卓着的滋补功效而名列“中华九大仙草”之首 铁皮石斛是多年野生植物，生是在岩石峭壁上，分布在我国的西南部，广西、云南、 贵州等山区;中南地区的湖南、江西、广东以及福建浙江等省2、 性状《中国药典》（2005版）规定为嚼之有黏性，经实样比较，本品改为气微，味淡，嚼 之有粘，汁多无渣较合适3、 鉴别（1）铁皮石斛的显微鉴别：表皮细胞外壁及侧壁稍增厚、微木化维管束略排成4~5 圈，外侧小型薄壁细胞种有的含硅质块含草酸钙针晶束细胞多见于近表皮处显 微特征图如下：（2）薄层色谱法鉴别：原标准中无此鉴别方法。
在此添加此方法鉴别，方法如 下：供试品溶液制备:取以上各样粗粉0.5g，分别置25mL带塞三角瓶中，各加浓氨水6 滴，使粉末润湿，密塞放置15min,各加氯仿5mL冷浸过夜，再于50C温浸6h,放 冷滤过，滤液浓缩至干，加氯仿 0.1mL 溶解，做为供试品溶液取以上各样供试品 溶液各10uL，点于0.5%CMC-Na硅胶G板上，置于氨蒸气饱和的氯仿-甲醇（10:8）展 开剂中展开，展距为10cm，取出，冷干，先置紫外光灯（365mm）下观察，各供试品在精心整理 不同位置上均呈蓝色荧光斑点（见下图 2）;然后喷改良碘化钛钾试液，各供试品在不 同位置上均呈橙红色斑点（见下图 2）3）红外光谱鉴别：将样品剪成粗粒混匀，于60C下干燥至恒重，取2g,除去叶鞘， 粉碎过200目筛,粉末放入洁净称量瓶并放入干燥器中备用精取样品4mg（使其最强 吸收峰的透光率在10%以下）KBr200mg,在红外灯下混合研磨均匀，放入模具内，压强 为9.8x 10八8Pa,作用时间3min,取出,可得直径13mm，厚度0.5mm左右的供试片，立即 放入样品架进行测量测定区域4000~400cm-l中速扫描为确保图谱的可比性，每 次取样量必须相同。
实验结果重复3 次,如其图谱稳定的情况下，将结果输入计算机 检索红外光谱库铁皮石斛在1600cm-1~1480cm-1处有一强吸收峰并带有两个肩 峰；1450cmT~1100cmT处有四重峰，中间二峰吸收强度较接近;1000cmT~700cmT处 有一高笔架峰，两侧有肩峰铁皮石斛红外光谱图如下图所示4、 检查水分照水分测定法测定，不超过6.0%总灰分不超过6.0%灰屑不超过3.0%败片率不超过1.0% 破碎率不超过3.0%5、 含量测定⑴仪器与试药Agilent 1100液相色谱仪（美国惠普公司），电子天平（MettlerToledoAG285），乙腈（Tedia公司,色谱纯），甲醇、磷酸（上海化学试剂有限公 司，分析纯）10批铁皮石斛药材采集于云南思茅石膏井镇，经南京中医药大学药学院 陆兔林教授鉴定为兰科植物精心整理色谱条件色谱柱为KromasilKR100-5C18(250mmx4.6mm,5“m)；流动相为乙腈 (A)-0.4%磷酸溶液(B)进行线性梯度洗脱，0~5min3%A~10%A,5~l2minl0%A~15%A,12~25minl5%A~22%A,25~40min22%A~35%A,4 0~50min35%A~55%A,50~60min55%A~60%A;体积流量：1.0mL/min;检测波长 270nm;柱温 30U ；运行时间为60mino(2)条件的优化空白试验精密吸取空白溶液(甲醇)10 mL,注入高效液相色谱仪， 按规定的梯度条件进行洗脱。
结果表明空白不干扰测定最佳检测波长首先对铁皮石斛药材的供试品溶液在200~400nm进行了 DAD全波 长扫描，发现其在270nm处能体现较多的吸收峰且强度较大，故选择270nm作为检测 波长3)提取条件的优化提取溶剂的优化在实验过程，考察了不同提取溶剂，包括石油醚、二氯甲烷、甲 醇、乙醇、95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、70%甲醇、50%甲醇等对样品提取效果的影 响,色谱图表明甲醇对铁皮石斛药材的提取效率较优提取方法的选择对加热回流、索氏提取、超声提取等提取方法进行了比较结果 表明索氏提取法能较好地将成分富集，因此确定索氏提取为样品的提取方法并进一 步考察了提取时间,分别对药材索氏提取2、3、4、5h进行了考察，结果表明对大多 数色谱峰而言，以4h提取效率最高,4、5h提取效率无明显差异，因此确定样品的索氏 提取时间为 4ho提取时间的优化取铁皮石斛供试品溶液按要求进样,在洗脱60min后,再保持60% 乙腈60min,经分析，铁皮石斛药材2h梯度洗脱图谱显示，保留时间60min后已无成分 残留确定铁皮石斛指纹图谱的提取时间为60mino精心整理(4) 不同色谱柱的考察比较YWG-C18柱(250mm x4.6mm,5“m)、 Kromasil—5C18(250mmx 4.6mm,5 “ m)、 LichrospherC18(250mmx 4.6mm,5 “ m)3 种色 谱柱，相同色谱条件下，以Kromasil-5C18柱色谱行为较好，因此，选用Kromasil-5C18 柱为指纹图谱分析用色谱柱。
⑸供试品溶液的制备取铁皮石斛药材,50°C干燥4h,粉碎,过60目筛取药材粉 末 1g, 精密称定, 置于索氏提取器中, 加甲醇 50mL 水浴回流 4h, 提取液挥去部分溶剂, 冷却,加甲醇定容至10mL,用0.45 “ m微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液(6) 精密度试验取同一供试品溶液，连续进样5次,考察各色谱峰相似度的一致 性,利用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版进行相似 度评价，相似度平均值为0.999,RSD为0.0%结果表明仪器精密度良好7) 重现性试验取同一批铁皮石斛药材分别提取制备5份供试品，进行检测，考 察各色谱峰相似度的一致性，利用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系 统》2004年A版进行相似度评价，相似度平均值为0.999,RSD为0.1%结果表明实 验重现性良好8) 稳定性试验取同一供试品溶液,分别在0、1、4、7、12、16、24、29h检 测，考察各色谱峰相似度的一致性,利用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度 评价系统》2004年A版进行相似度评价，相似度平均值为1,RSD为0.1%结果表明 供试品在 29h 内稳定。