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1、SRB 实验方法：1. 细胞铺板 96 孔板：H1975细胞系：配制成80000个/ml的细胞悬液，使用排枪加样，每孔加 入100卩1细胞悬液，使每空细胞总数为8000个。A431细胞系：配制成100000 个/ml的细胞悬液，使用排枪加样，每孔加 入100卩1细胞悬液，使每孔细胞总数为10000个。37C孵箱，5%CO2培养过夜。2. 加药前：换液：使用排枪吸去 96 孔板中培养基，注意尽量吸干净，加入含有 0.1%FBS的培养基150卩1。3. 药物稀释：(1)、母液配制：根据化合物分子量，重量以及纯度，加入适量 DMSO， 配制成10mM浓度的母液，4度冰箱保存。(2) 、化合物稀释：化
2、合物检测最高浓度为10pM, 5倍稀释共十个梯度。 首先于EP管中用含0.1%FBS的培养基稀释待测化合物，并使其为终浓度 4倍，即500卩1 0.1%FBS培养基中加入2卩1化合物母液，于振荡器中振荡 均匀，取1深孔板，加入400卩1含0.1%FBS+4%DMSO的培养基(第一 列孔除外)，将EP管中稀释好的化合物加入第一列孔中，用排枪取100yl， 加入到第二列孔中，振荡混匀后，换新枪尖再将第二列中培养基化合物取 100卩l加入到第三列中，振荡混匀，依次类推，直至10个浓度全部稀释完 毕。(3) 、加药：加药前，用30山50% TCA固定6孔细胞，作为加药前T0 对照。将稀释好的化合物加入到铺有细胞的96孔板中，每孔50pl。加药 后，96孔板放入37度5%CO2的孵箱中，孵育72h。4. 孵育结束后，每孔加入50pl 50%TCA，置于4C冰箱中固定1h。5. 弃液，300pl ddH2O洗5次，室温或于烘箱中放置，直至孔板完全干燥。6. 每空加入 50pl 0.4%SRB，染色 20min。7. 弃染液，用 1%乙酸洗4次，室温干燥透。8. 加入 200ul 10mM unbuffered Trisbase (PH=10.5 )，平板振荡至完全溶解。9. 酶标仪测定 490nm 吸光度。10. 计算 IC50 值。
